摘要 | 第3-5页 |
ABSTRACT | 第5-7页 |
中英文缩略词表 | 第10-12页 |
第1章 引言 | 第12-15页 |
第2章 材料和方法 | 第15-29页 |
2.1 材料 | 第15-17页 |
2.1.1 实验细胞 | 第15页 |
2.1.2 主要试剂 | 第15-16页 |
2.1.3 实验设备及耗材 | 第16-17页 |
2.2 主要试剂的配置 | 第17-19页 |
2.3 细胞培养 | 第19-20页 |
2.4 病毒转染 | 第20-21页 |
2.4.1 干扰慢病毒制作 | 第20页 |
2.4.2 病毒感染 | 第20-21页 |
2.5 qRT-PCR 检测 AGS、MGC803 经慢病毒感染前后β-catenin 的 mRNA表达 | 第21-23页 |
2.5.1 RNA 提取 | 第21-22页 |
2.5.2 cDNA 合成 | 第22-23页 |
2.5.3 荧光定量 PCR | 第23页 |
2.6 Wester Blot 检测 AGS、MGC803 经慢病毒感染前后目的蛋白的表达 | 第23-25页 |
2.6.1 蛋白提取 | 第23-24页 |
2.6.2 蛋白电泳 | 第24页 |
2.6.3 转膜 | 第24页 |
2.6.4 抗原抗体结合及曝光 | 第24-25页 |
2.7 MTT 法检测不同浓度 5-氟尿嘧啶(5-Fu)对转染前后 AGS、MGC803细胞的增殖抑制情况 | 第25-26页 |
2.7.1 原理 | 第25页 |
2.7.2 步骤 | 第25-26页 |
2.8 Transwell 法细胞侵袭实验和细胞迁移实验 | 第26-27页 |
2.8.1 细胞侵袭实验 | 第26-27页 |
2.8.2 细胞迁移实验 | 第27页 |
2.9 流式细胞术检测细胞凋亡和细胞生长周期变化 | 第27-28页 |
2.9.1 Annexin-V-PE/7-AAD 双染 FCM 法检测细胞凋亡的变化 | 第27页 |
2.9.2 PI 单染 FCM 法检测细胞生长周期 | 第27-28页 |
2.10 统计方法 | 第28-29页 |
第3章 结果 | 第29-42页 |
3.1 干扰β-catenin 慢病毒感染 AGS、MGC803 细胞后镜下观察 | 第29页 |
3.2 干扰β-catenin 慢病毒感染 AGS、MGC803 细胞后胞内β-catenin mRNA表达的影响 | 第29-31页 |
3.3 Western blot 检测干扰β-catenin 慢病毒感染 AGS、MGC803 细胞后细胞内β-catenin 蛋白表达 | 第31-32页 |
3.4 MTT 法检测不同浓度 5-Fu 对 AGS、MGC803 细胞株感染干扰慢病毒前后的增殖抑制情况 | 第32-33页 |
3.5 Transwell 法细胞侵袭实验和细胞迁移实验 | 第33-36页 |
3.5.1 Transwell 法细胞侵袭实验 | 第33-35页 |
3.5.2 Transwell 法细胞迁移实验 | 第35-36页 |
3.6 流式细胞术检测细胞凋亡和细胞生长周期变化 | 第36-39页 |
3.6.1 Annexin-V-PE/7-AAD 双染 FCM 法检测细胞凋亡的变化 | 第36-37页 |
3.6.2 PI 单染 FCM 法检测细胞生长周期 | 第37-39页 |
3.7 Western blot 检测β-catenin 下游靶基因编码蛋白和 5-Fu 代谢酶 | 第39-42页 |
第4章 讨论 | 第42-50页 |
4.1 细胞周期 | 第44-45页 |
4.2 细胞凋亡 | 第45-46页 |
4.3 细胞侵袭、转移 | 第46-48页 |
4.4 细胞药物敏感性 | 第48-50页 |
第5章 结论 | 第50-51页 |
致谢 | 第51-52页 |
参考文献 | 第52-57页 |
综述 | 第57-64页 |
参考文献 | 第62-64页 |