| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-25页 |
| 1.1 副溶血弧菌生物学特性 | 第11-12页 |
| 1.1.1 形态染色 | 第11页 |
| 1.1.2 培养特性 | 第11-12页 |
| 1.1.3 生化反应 | 第12页 |
| 1.2 副溶血弧菌毒力研究概述 | 第12-17页 |
| 1.2.1 耐热直接溶血素(TDH) | 第13-14页 |
| 1.2.2 不耐热溶血素(TLH) | 第14页 |
| 1.2.3 粘附因子 | 第14页 |
| 1.2.4 Ⅲ型分泌系统(type Ⅲ secretion system,T3SS) | 第14-16页 |
| 1.2.5 Ⅵ型分泌系统(Type Ⅵ secretion system,T6SS) | 第16页 |
| 1.2.6 多种酶类 | 第16-17页 |
| 1.3 副溶血弧菌生物膜研究现状 | 第17-25页 |
| 1.3.1 鞭毛 | 第17-19页 |
| 1.3.2 四型菌毛(type Ⅳ pili) | 第19页 |
| 1.3.3 多糖 | 第19-21页 |
| 1.3.4 环二鸟苷酸(c-di-GMP) | 第21-23页 |
| 1.3.5 弧菌的密度感应(Quorum sensing,QS)系统 | 第23-25页 |
| 第2章 研究目的及意义 | 第25-27页 |
| 第3章 AphA蛋白对副溶血弧菌生物膜表型和c-di-GMP合成的影响实验 | 第27-35页 |
| 3.1 材料 | 第27-28页 |
| 3.1.1 菌株和质粒 | 第27页 |
| 3.1.2 酶和试剂盒 | 第27页 |
| 3.1.3 主要溶液的配制 | 第27-28页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第28页 |
| 3.2 方法 | 第28-30页 |
| 3.2.1 细菌培养 | 第28页 |
| 3.2.2 菌落表面褶皱 | 第28页 |
| 3.2.3 生物膜结晶紫染色 | 第28-29页 |
| 3.2.4 c-di-GMP测定 | 第29-30页 |
| 3.3 结果 | 第30-32页 |
| 3.3.1 AphA蛋白影响VP菌生物膜表型 | 第30-31页 |
| 3.3.2 AphA促进c-di-GMP的合成 | 第31-32页 |
| 3.4 讨论 | 第32-33页 |
| 3.5 本章小结 | 第33-35页 |
| 第4章 副溶血弧菌AphA蛋白的DNA结合活性分析 | 第35-57页 |
| 4.1 材料 | 第35-41页 |
| 4.1.1 菌株和质粒 | 第35-36页 |
| 4.1.2 酶,试剂盒 | 第36页 |
| 4.1.3 药品,试剂,溶液的配制 | 第36-40页 |
| 4.1.4 主要仪器 | 第40-41页 |
| 4.2 方法 | 第41-49页 |
| 4.2.1 pET-28a-c(+)质粒图谱 | 第41-42页 |
| 4.2.2 AphA蛋白的表达载体的构建 | 第42-45页 |
| 4.2.3 His-AphA蛋白的表达和纯化 | 第45-47页 |
| 4.2.4 AphA蛋白的DNA结合活性分析 | 第47页 |
| 4.2.5 凝胶阻滞实验(electrophoretic mobilityshift assay,EMSA) | 第47-49页 |
| 4.3 结果 | 第49-54页 |
| 4.3.1 AphA蛋白的表达 | 第49-51页 |
| 4.3.2 AphA蛋白的DNA结合活性分析 | 第51-52页 |
| 4.3.3 凝胶阻滞实验(EMSA) | 第52-54页 |
| 4.4 讨论 | 第54页 |
| 4.5 本章小结 | 第54-57页 |
| 第5章 副溶血弧菌LacZ报告基因融合实验及实时定量ImPCR | 第57-71页 |
| 5.1 材料 | 第58页 |
| 5.1.1 菌株和质粒 | 第58页 |
| 5.1.2 酶,试剂盒 | 第58页 |
| 5.1.3 药品,试剂,溶液的配制 | 第58页 |
| 5.1.4 主要仪器 | 第58页 |
| 5.2 方法 | 第58-66页 |
| 5.2.1 LacZ重组质粒构建 | 第58-61页 |
| 5.2.2 重组质粒转化入副溶血弧菌野生株和突变株 | 第61-63页 |
| 5.2.3 β-半乳糖苷酶活性检测 | 第63-64页 |
| 5.2.4 实时定量逆转录PCR(real time RT-PCR) | 第64-66页 |
| 5.3 结果 | 第66-68页 |
| 5.3.1 LacZ报告基因融合实验结果 | 第66-67页 |
| 5.3.2 AphA抑制scrABC和scrG的转录 | 第67-68页 |
| 5.4 讨论 | 第68-69页 |
| 5.5 本章小结 | 第69-71页 |
| 第6章 结论 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-83页 |
| 英文缩略词表 | 第83-85页 |
| 致谢 | 第85-87页 |
| 攻读期间发表论著及参加科研情况 | 第87页 |
| 1. 发表的论文 | 第87页 |
| 2. 参与的科研 | 第87页 |
