| 摘要 | 第6-8页 |
| abstract | 第8-9页 |
| 文献综述 | 第13-23页 |
| 第一章 奶牛乳腺炎及IL-1β的研究进展 | 第13-23页 |
| 1.1 奶牛乳腺炎研究进展 | 第13-16页 |
| 1.1.1 奶牛乳腺炎概述 | 第13页 |
| 1.1.2 乳腺炎的感染机制 | 第13-15页 |
| 1.1.3 炎症状态下乳腺组织的病理变化 | 第15-16页 |
| 1.2 血乳屏障研究进展 | 第16-17页 |
| 1.3 BMECs与紧密连接研究进展 | 第17-18页 |
| 1.3.1 BMECs与紧密连接概述 | 第17页 |
| 1.3.2 紧密连接的分子结构 | 第17-18页 |
| 1.4 紧密连接蛋白研究进展 | 第18-19页 |
| 1.4.1 紧密连接蛋白分子结构 | 第18页 |
| 1.4.2 紧密连接蛋白的作用 | 第18-19页 |
| 1.5 IL-1β生物学特性概述 | 第19-21页 |
| 1.5.1 IL-1β概述 | 第19-20页 |
| 1.5.2 IL-1家族及其调节 | 第20页 |
| 1.5.3 炎性介质激活IL-1β | 第20-21页 |
| 1.5.4 IL-1β在紧密连接中的作用 | 第21页 |
| 1.6 MLCK研究进展 | 第21-23页 |
| 1.6.1 MLCK生物学概述 | 第21页 |
| 1.6.2 MLCK抑制剂与潜在抑制剂 | 第21-22页 |
| 1.6.3 MLCK在炎症发生中的活化 | 第22-23页 |
| 实验研究 | 第23-51页 |
| 第二章 LPS和LTA侵染奶牛BMECs引起不同炎性应答的RNA-seq分析 | 第23-34页 |
| 2.1 材料 | 第23页 |
| 2.1.1 乳腺上皮细胞 | 第23页 |
| 2.2 仪器设备、耗材与试剂 | 第23-24页 |
| 2.2.1 仪器与设备 | 第23页 |
| 2.2.2 试剂与耗材 | 第23-24页 |
| 2.3 方法 | 第24-26页 |
| 2.3.1 乳腺上皮细胞的复苏与冻存 | 第24页 |
| 2.3.2 LPS和LTA诱导乳腺炎模型的建立 | 第24页 |
| 2.3.3 总RNA的提取、cDNA文库的构建与RNA-Seq | 第24页 |
| 2.3.4 数据处理和差异表达基因的筛选 | 第24-25页 |
| 2.3.5 差异表达基因的基因本体分析 | 第25页 |
| 2.3.6 KEGG通路富集分析 | 第25页 |
| 2.3.7 数据分析 | 第25-26页 |
| 2.4 结果 | 第26-31页 |
| 2.4.1 LTA和LPS诱导的差异表达基因的mRNA对比 | 第26-27页 |
| 2.4.2 差异表达基因的GO富集分析 | 第27-29页 |
| 2.4.3 差异表达基因的KEGG通路富集分析 | 第29-31页 |
| 2.5 讨论 | 第31-33页 |
| 小结 | 第33-34页 |
| 第三章 IL-1β在血乳屏障中上皮细胞紧密连接的作用机制 | 第34-51页 |
| 3.1 材料 | 第34页 |
| 3.1.1 乳腺组织 | 第34页 |
| 3.1.2 小鼠 | 第34页 |
| 3.2 仪器设备、耗材与试剂 | 第34-35页 |
| 3.2.1 仪器与设备 | 第34-35页 |
| 3.2.2 试剂与耗材 | 第35页 |
| 3.3 方法 | 第35-41页 |
| 3.3.1 qRT-PCR验证RNA-seq差异表达基因 | 第35-36页 |
| 3.3.2 Westernblot检测紧密连接相关蛋白的表达 | 第36-37页 |
| 3.3.3 ELISA检测IL-1β和TNF-α的分泌表达 | 第37页 |
| 3.3.4 CCK-8检测细胞增殖 | 第37-38页 |
| 3.3.5 免疫荧光显微镜观察ZO-1、Occludin和Claudin蛋白的表达 | 第38页 |
| 3.3.7 小鼠乳腺IL-1β注射 | 第38页 |
| 3.3.8 牛外周血中性粒细胞的提取 | 第38-39页 |
| 3.3.9 中性粒细胞趋化性实验 | 第39页 |
| 3.3.10 透射电镜观察小鼠BMECs紧密连接变化 | 第39-40页 |
| 3.3.11 跨上皮电阻值测定 | 第40-41页 |
| 3.3.12 FITC-葡聚糖通透性测定 | 第41页 |
| 3.3.13 数据分析 | 第41页 |
| 3.4 结果 | 第41-48页 |
| 3.4.1 .LPS处理BMECs差异表达基因的验证 | 第41-42页 |
| 3.4.2 .IL-1β在炎性组织和BMECs中的表达 | 第42页 |
| 3.4.3 .IL-1β对BMECs增殖的影响 | 第42-43页 |
| 3.4.4 .IL-1β引起BMECs间紧密连接通透性的增高 | 第43-44页 |
| 3.4.5 IL-1β破坏了小鼠乳腺组织中上皮细胞间完整的紧密连接 | 第44-46页 |
| 3.4.7 MLCK在IL-1β引起的BMECs紧密连接通透性增高中发挥的作用 | 第46-48页 |
| 3.4.6 ERK1/2调节IL-1β引起的MLCK基因与蛋白的表达 | 第48页 |
| 3.5 讨论 | 第48-51页 |
| 全文结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-55页 |
| 附录 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 作者简介 | 第57页 |
