| 縮写词表 | 第10-12页 |
| 摘要 | 第12-13页 |
| Abstract | 第13-14页 |
| 第一章 前言 | 第15-28页 |
| 1 有丝分裂纺锤体组装检验点(SAC) | 第15-19页 |
| 1.1 Mad1和Mad2 | 第16-18页 |
| 1.2 BubR1/Mad3 | 第18页 |
| 1.3 Bub1和Bub3 | 第18-19页 |
| 2 有丝分裂检验点复合体(MCC)的结构与组装以及生物学功能 | 第19-20页 |
| 3 后期促进复合体(APC/C)的结构以及参与的生物学过程 | 第20-23页 |
| 3.1 APC/C的结构 | 第20-21页 |
| 3.2 APC/C的活性调控 | 第21-23页 |
| 4 γ-微管蛋白复合体在裂殖酵母有丝分裂中的作用 | 第23-24页 |
| 5 裂殖酵母Dnt1的功能以及纺锤体组装检验点沉默的研究进展 | 第24-26页 |
| 5.1 Dnt1是胞质分裂的抑制因子 | 第24页 |
| 5.2 Dnt1是纺锤体检验点蛋白Dma1的负调控因子 | 第24-25页 |
| 5.3 纺锤体检验点沉默的机制 | 第25-26页 |
| 6 本论文的研究目的、内容和意义 | 第26-28页 |
| 第二章 材料和方法 | 第28-54页 |
| 1 材料 | 第28-44页 |
| 1.1 大肠杆菌菌株E.coli DH5α | 第28页 |
| 1.2 酵母菌株 | 第28-33页 |
| 1.3 质粒 | 第33-34页 |
| 1.4 引物 | 第34-35页 |
| 1.5 分子生物学工具酶 | 第35页 |
| 1.6 主要试剂及耗材 | 第35-36页 |
| 1.7 主要仪器及设备 | 第36-38页 |
| 1.8 常用培养基、主要缓冲溶液的配制 | 第38-44页 |
| 2 方法 | 第44-54页 |
| 2.1 裂殖酵母菌株的构建 | 第44-45页 |
| 2.2 Drop Test | 第45-46页 |
| 2.3 裂殖酵母基因组提取—破碎法 | 第46页 |
| 2.4 裂殖酵母转化 | 第46-47页 |
| 2.5 质粒DNA的制备 | 第47-48页 |
| 2.6 琼脂糖胶回收DNA片段 | 第48页 |
| 2.7 PCR产物纯化回收 | 第48页 |
| 2.8 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第48-49页 |
| 2.9 质粒DNA的细菌转化 | 第49页 |
| 2.10 常规PCR | 第49-50页 |
| 2.11 定点突变PCR | 第50页 |
| 2.12 DNA限制性内切酶酶切反应 | 第50-51页 |
| 2.13 DNA连接 | 第51-52页 |
| 2.14 利用ImageJ软件测量细胞中Alp4和Alp6蛋白在SPB上的定位信号强度 | 第52页 |
| 2.15 γ-tubulin蛋白体内泛素化检测 | 第52-53页 |
| 2.16 免疫印迹检测(Western blot) | 第53-54页 |
| 第三章 实验结果和分析 | 第54-72页 |
| 1 Dnt1对于纺锤体组装检验点沉默是必需的 | 第54-56页 |
| 2 dnt1+缺失后引起的SAC持续激活仍然依赖于SAC的关键组分Mad2,Mad3和Bub1 | 第56-58页 |
| 3 Dnt1与Dis2和Bub3在不同的通路上调控SAC沉默 | 第58-61页 |
| 4 Dnt1调控MCC与APC的解聚，进而影响SAC沉默 | 第61-62页 |
| 5 Dnt1参与SAC沉默部分依赖于Dma1 | 第62-72页 |
| 5.1 dnt1+缺失引起的SAC沉默缺陷并不是由于Dmal泛素化γ-微管蛋白 | 第63-65页 |
| 5.2 dnt1+缺失延迟Plo1在SPBs上的定位,这一过程部分依赖于Dma1 | 第65-67页 |
| 5.3 Plo1提前定位到SPB或持续性激活都不能逆转由dnt1△突变体引起的检验点沉默缺陷 | 第67-72页 |
| 第四章 讨论 | 第72-76页 |
| 1 Dnt1对纺锤体检验点沉默的调控 | 第72-74页 |
| 2 Dnt1调控纺锤体检验点沉默机制的探讨 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-84页 |
| 附录Ⅰ | 第84-85页 |
| 致谢 | 第85页 |
