| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 前言 | 第11-27页 |
| 1.靶向CD19分子的CAR-T疗法 | 第11-17页 |
| 1.1 αCD19-CAR-T细胞抗B细胞恶性肿瘤的临床应用 | 第14-15页 |
| 1.2 αCD19-CAR-T细胞疗法在临床应用中的不良反应与潜在风险 | 第15-17页 |
| 2.胆固醇 | 第17-19页 |
| 2.1 胆固醇与细胞信号传导及T细胞功能 | 第18页 |
| 2.2 胆固醇与胆固醇酰基转移酶 | 第18-19页 |
| 3.RNA干扰技术 | 第19-26页 |
| 3.1 RNA干扰的发现及发展 | 第19-20页 |
| 3.2 RNA干扰的作用机制 | 第20-22页 |
| 3.3 RNA干扰的特点 | 第22页 |
| 3.4 siRNA的设计、合成与转染 | 第22-24页 |
| 3.5 RNA干扰的应用 | 第24-26页 |
| 4.研究思路及意义 | 第26-27页 |
| 第二章 ACAT1-SHRNA慢病毒载体的构建及筛选 | 第27-62页 |
| 引言 | 第27页 |
| 1.实验材料 | 第27-35页 |
| 1.1 细胞及菌株 | 第27页 |
| 1.2 慢病毒质粒 | 第27-30页 |
| 1.3 主要试剂 | 第30-31页 |
| 1.4 主要试剂配制 | 第31-34页 |
| 1.5 主要仪器 | 第34-35页 |
| 1.6 主要耗材 | 第35页 |
| 2.实验方法 | 第35-51页 |
| 2.1 构建pLL3.7-ACAT1-shRNA慢病毒表达载体 | 第35-41页 |
| 2.2 筛选最佳干扰序列 | 第41-51页 |
| 3.实验结果 | 第51-60页 |
| 3.1 ACAT-siRNA靶向序列 | 第51-52页 |
| 3.2 ACAT1-shRNA碱基序列 | 第52页 |
| 3.3 ACAT1-shRNA模板电泳鉴定 | 第52-53页 |
| 3.4 pLL3.7载体酶切结果 | 第53页 |
| 3.5 pLL3.7-ACAT1-shRNA重组质粒酶切鉴定及测序结果 | 第53-55页 |
| 3.6 三质粒共转染293T细胞 | 第55-56页 |
| 3.7 病毒滴度测定 | 第56-58页 |
| 3.8 LV-ACAT1-shRNA感染Jurkat效率测定 | 第58页 |
| 3.9 ACAT1mRNA和蛋白表达水平的检测 | 第58-59页 |
| 3.10 ACAT1-shRNA持续性干扰效果检测 | 第59-60页 |
| 4.讨论 | 第60-61页 |
| 5.小结 | 第61-62页 |
| 第三章 ACAT1-SHRNA对ΑCD19-CART细胞免疫功能影响的研究 | 第62-90页 |
| 引言 | 第62页 |
| 1.实验材料 | 第62-64页 |
| 1.1 细胞及质粒 | 第62-63页 |
| 1.2 主要试剂、耗材、仪器 | 第63页 |
| 1.3 主要试剂配制 | 第63-64页 |
| 2.实验方法 | 第64-70页 |
| 2.1 构建pLL3.7-αCD19-CAR慢病毒表达载体 | 第64-67页 |
| 2.2 构建pLL3.7-ACAT1-shRNA-αCD19-CAR慢病毒表达载体 | 第67页 |
| 2.3 流式细胞术检测Raji、Daudi细胞株CD19表达情况 | 第67页 |
| 2.4 制备LV-CAR19、LV-1-CAR19、LV-NC-CAR19三种慢病毒 | 第67页 |
| 2.5 分选及活化T淋巴细胞 | 第67-69页 |
| 2.6 制备CAR-Jur、CAR-T细胞 | 第69页 |
| 2.7 检测CAR-Jur细胞、CAR-T细胞免疫功能 | 第69-70页 |
| 3.实验结果 | 第70-86页 |
| 3.1 pLL3.7-αCD19-CAR载体的鉴定 | 第70-71页 |
| 3.2 pLL3.7-ACAT1-shRNA-αCD19-CAR重组质粒的鉴定 | 第71-72页 |
| 3.3 CD19在Raji、Daudi细胞表面的表达情况 | 第72-73页 |
| 3.4 慢病毒LV-CAR19、LV-NC-CAR19、LV-1-CAR19的制备 | 第73-74页 |
| 3.5 沉默ACAT1对CAR19-Jur细胞免疫功能的影响 | 第74-81页 |
| 3.6 沉默ACAT1对CAR19-T细胞免疫功能的影响 | 第81-86页 |
| 4.讨论 | 第86-89页 |
| 5.小结 | 第89-90页 |
| 第四章 结论与展望 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-101页 |
| 附录 | 第101页 |
