| 摘要 | 第8-11页 |
| ABSTRACT | 第11-14页 |
| 英文缩略词表 | 第15-17页 |
| 第一部分 文献综述 | 第17-57页 |
| 第一章 黄病毒囊膜蛋白与受体的研究进展 | 第17-33页 |
| 1 黄病毒囊膜蛋白的结构与功能 | 第17-22页 |
| 2 膜融合机制 | 第22-24页 |
| 3 黄病毒的受体研究现状 | 第24-27页 |
| 参考文献 | 第27-33页 |
| 第二章 以病毒入胞为靶点的抗病毒策略 | 第33-41页 |
| 1 抗病毒的靶点之一--病毒粘附蛋白与受体的结合 | 第33-36页 |
| 1.1 病毒粘附蛋白 | 第33-34页 |
| 1.2 受体与辅受体(receptors and co-receptors) | 第34-36页 |
| 1.3 病毒受体模拟分子 | 第36页 |
| 2 抗病毒的靶点之二--膜融合 | 第36-37页 |
| 3 抗病毒的靶点之三--病毒内化 | 第37页 |
| 4 问题与展望 | 第37-38页 |
| 参考文献 | 第38-41页 |
| 第三章 病毒受体的研究方法 | 第41-57页 |
| 1 根据已有知识推测受体 | 第41页 |
| 2 用细胞特异性单抗鉴定受体--单克隆抗体法 | 第41-42页 |
| 3 用抗独特型抗体模拟病毒鉴定受体--抗独特型抗体法 | 第42页 |
| 4 分子克隆 | 第42页 |
| 5 病毒覆盖蛋白结合试验 | 第42-43页 |
| 6 亲和层析法 | 第43页 |
| 7 筛选易感细胞CDNA文库鉴别病毒受体 | 第43-44页 |
| 7.1 利用病毒感染的特性筛选阳性克隆 | 第44页 |
| 7.2 在病毒基因中加入报告基因作为筛选标志 | 第44页 |
| 7.3 利用FACS分离获得易感性细胞 | 第44页 |
| 8 噬菌体表面展示技术 | 第44-45页 |
| 9 免疫共沉淀技术 | 第45页 |
| 10 GST PULL-DOWN方法 | 第45-46页 |
| 11 酵母双杂交技术 | 第46-48页 |
| 12 表面等离子共振技术 | 第48页 |
| 13 蛋白质芯片 | 第48-49页 |
| 14 荧光共振能量转移技术 | 第49-50页 |
| 15 二维电泳与质谱技术 | 第50-51页 |
| 16 多种病毒受体研究方法的联合使用 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-57页 |
| 第二部分 研究内容 | 第57-127页 |
| 第四章 日本脑炎病毒E蛋白受体结合域及其突变体的可溶性表达与多克隆抗体制备 | 第57-71页 |
| 摘要 | 第57-58页 |
| 1 材料与方法 | 第58-64页 |
| 1.1 质粒、菌株和动物 | 第58页 |
| 1.2 主要试剂 | 第58页 |
| 1.3 主要仪器 | 第58-59页 |
| 1.4 EDⅢ及其突变体ΔEDⅢ原核表达载体的构建 | 第59-61页 |
| 1.5 重组表达载体pET-EDⅢ或pET-/ΔEDⅢ的诱导表达 | 第61-62页 |
| 1.6 重组蛋白的His-Bind螯合层析柱纯化 | 第62-63页 |
| 1.7 纯化的重组蛋白EDⅢ或ΔEDⅢ的SDS-PAGE分析 | 第63页 |
| 1.8 纯化重组蛋白EDⅢ或ΔEDⅢ的Western Blotting分析 | 第63-64页 |
| 1.9 纯化重组蛋白EDⅢ或ΔEDⅢ的透析和定量 | 第64页 |
| 1.10 鼠抗重组蛋白EDⅢ血清的制备与鉴定 | 第64页 |
| 2 结果 | 第64-65页 |
| 2.1 重组表达载体pET-EDⅢ或pET-ΔEDⅢ的酶切鉴定 | 第64-65页 |
| 2.2 测序结果 | 第65页 |
| 2.3 表达产物的可溶性分析及纯化效果的分析 | 第65页 |
| 2.4 纯化的重组蛋白EDⅢ或ΔEDⅢ的Westem Blotting分析 | 第65页 |
| 2.5 纯化重组蛋白EDⅢ或ΔEDⅢ的定量 | 第65页 |
| 2.6 鼠抗重组蛋白EDⅢ血清的Western Blotting分析 | 第65页 |
| 3 讨论 | 第65-68页 |
| 参考文献 | 第68-69页 |
| Abstract | 第69-71页 |
| 第五章 囊膜蛋白结构域Ⅲ及其保守的RGD基序在日本脑炎病毒入胞过程的作用分析 | 第71-85页 |
| 摘要 | 第71-72页 |
| 1 材料与方法 | 第72-75页 |
| 1.1 病毒和细胞 | 第72页 |
| 1.2 主要仪器与试剂 | 第72页 |
| 1.3 细胞毒性试验 | 第72-73页 |
| 1.4 细胞膜受体结合试验 | 第73页 |
| 1.5 黏附试验 | 第73页 |
| 1.6 阻断试验 | 第73页 |
| 1.7 噬斑减少试验 | 第73-74页 |
| 1.8 荧光定量PCR检测 | 第74-75页 |
| 1.9 数据分析 | 第75页 |
| 2 结果 | 第75-76页 |
| 2.1 细胞毒性评价 | 第75页 |
| 2.2 细胞膜受体结合试验 | 第75页 |
| 2.3 黏附试验 | 第75页 |
| 2.4 EDⅢ、AEDⅢ或RGD和RGE阻断JEV结合BHK-21到细胞表面的差异分析 | 第75-76页 |
| 3 讨论 | 第76-83页 |
| 参考文献 | 第83-84页 |
| Abstract | 第84-85页 |
| 第六章 日本脑炎病毒囊膜蛋白特异性结合肽的筛选与鉴定 | 第85-99页 |
| 摘要 | 第85-86页 |
| 1 材料与方法 | 第86-91页 |
| 1.1 材料 | 第86-87页 |
| 1.2 方法 | 第87-91页 |
| 2 结果 | 第91-92页 |
| 2.1 噬菌体的富集效应 | 第91页 |
| 2.2 噬菌体克隆与JEV囊膜蛋白(E)结合特异性测定 | 第91页 |
| 2.3 阳性噬菌体DNA序列分析 | 第91-92页 |
| 2.4 表面等离子体共振(SPR)技术测定噬菌体展示短肽对靶分子亲和力的结果 | 第92页 |
| 3 讨论 | 第92-96页 |
| 参考文献 | 第96-98页 |
| Abstract | 第98-99页 |
| 第七章 日本脑炎病毒囊膜蛋白结合肽体内外抗病毒活性的研究 | 第99-113页 |
| 摘要 | 第99页 |
| 1 材料与方法 | 第99-102页 |
| 1.1 病毒、细胞和实验动物 | 第99-100页 |
| 1.2 主要仪器与试剂 | 第100页 |
| 1.3 细胞毒性试验 | 第100页 |
| 1.4 体外抑制试验 | 第100页 |
| 1.5 噬斑减少试验 | 第100-101页 |
| 1.6 荧光定量PCR检测 | 第101-102页 |
| 1.7 体内试验 | 第102页 |
| 1.8 病理组织切片制作及HE染色 | 第102页 |
| 1.9 数据分析 | 第102页 |
| 2 结果 | 第102-104页 |
| 2.1 细胞毒性评价 | 第102-103页 |
| 2.2 六种囊膜蛋白结合肽体外抑制JEV感染BHK-21细胞 | 第103页 |
| 2.3 囊膜蛋白结合肽P1在BHK-21、PK15和Vero细胞上抑制JEV感染 | 第103页 |
| 2.4 体内试验 | 第103-104页 |
| 3 讨论 | 第104-111页 |
| 参考文献 | 第111-112页 |
| Abstraet | 第112-113页 |
| 第八章 日本脑炎病毒在PK15细胞上膜受体的鉴定 | 第113-127页 |
| 摘要 | 第113-114页 |
| 1 材料与方法 | 第114-116页 |
| 1.1 病毒、细胞和抗体 | 第114页 |
| 1.2 主要试剂 | 第114页 |
| 1.3 病毒纯化 | 第114页 |
| 1.4 细胞膜蛋白制备 | 第114-115页 |
| 1.5 VOPBA | 第115页 |
| 1.6 western blot分析膜蛋白与抗HSC70的结合 | 第115页 |
| 1.7 抗体阻断试验 | 第115-116页 |
| 1.8 间接免疫荧光试验(IFA)和激光扫描共聚焦显微镜((Laser Scanning Confocal Microscope,LSCM)观察 | 第116页 |
| 1.9 数据分析 | 第116页 |
| 2 结果 | 第116-118页 |
| 2.1 制备细胞膜蛋白的SDS-PAGE分析 | 第116页 |
| 2.2 VOPBA鉴定在PK15、Vero和BHK-21细胞上的JEV结合蛋白 | 第116-117页 |
| 2.3 western blot分析膜蛋白与抗HSC70的结合 | 第117页 |
| 2.4 抗HSC 70抗体阻断JEV与PK15、Vero和BHK-21细胞的结合 | 第117页 |
| 2.5 激光扫描共聚焦显微镜((Laser Scanning Confocal Microscope,LSCM)观察 | 第117-118页 |
| 3 讨论 | 第118-123页 |
| 参考文献 | 第123-125页 |
| Abstract | 第125-127页 |
| 全文总结 | 第127-129页 |
| 致谢 | 第129-131页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第131页 |
