| 摘要 | 第3-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 第一章 研究背景和文献综述 | 第15-41页 |
| 1.1 斑马鱼心脏发育概述 | 第15-20页 |
| 1.2 脊椎动物心脏早期发育的分子调控 | 第20-29页 |
| 1.2.1 NK-2同源异性因子 | 第20-22页 |
| 1.2.2 锌指蛋白GATA转录因子 | 第22-24页 |
| 1.2.3 Nkx2.5和GATA4调控心脏早期发育的信号通路 | 第24-27页 |
| 1.2.4 其它因子对心脏早期发育的调控 | 第27-29页 |
| 1.3 细胞增殖调控 | 第29-35页 |
| 1.3.1 细胞周期 | 第30页 |
| 1.3.2 细胞增殖的调控 | 第30-35页 |
| 1.3.2.1 生长因子与生长因子受体 | 第30-31页 |
| 1.3.2.2 信号系统的影响 | 第31-32页 |
| 1.3.2.3 癌基因、抑癌基因、细胞周期引擎分子Cdk-cyclin | 第32-33页 |
| 1.3.2.4 ATF4对细胞增殖的调控 | 第33-34页 |
| 1.3.2.5 GATA4对细胞增殖的调控 | 第34-35页 |
| 1.4 粘附分子 | 第35-37页 |
| 1.5 POPDC家族 | 第37-39页 |
| 1.6 本文研究意义与研究目标 | 第39-41页 |
| 第二章 POP3基因的克隆及其蛋白对心脏前体细胞的增殖调控 | 第41-93页 |
| 2.1 前言 | 第41页 |
| 2.2 材料与方法 | 第41-62页 |
| 2.2.1 材料、试剂与设备 | 第41-44页 |
| 2.2.2 常规分子生物学实验方法 | 第44-53页 |
| 2.2.2.1 PCR反应 | 第44-46页 |
| 2.2.2.2 PCR产物的纯化回收 | 第46-47页 |
| 2.2.2.3 产物与载体的连接 | 第47页 |
| 2.2.2.4 转化(热休克法) | 第47页 |
| 2.2.2.5 质粒的小量制备 | 第47-48页 |
| 2.2.2.6 阳性克隆的筛选与鉴定 | 第48-49页 |
| 2.2.2.7 测序 | 第49页 |
| 2.2.2.8 总RNA的提取 | 第49页 |
| 2.2.2.9 半定量RT-PCR | 第49-50页 |
| 2.2.2.10 真核表达重组质粒的大量制备 | 第50-51页 |
| 2.2.2.11 常规细胞培养 | 第51页 |
| 2.2.2.12 转基因稳定表达细胞系的建立 | 第51-52页 |
| 2.2.2.13 Western blot | 第52页 |
| 2.2.2.14 免疫荧光 | 第52-53页 |
| 2.2.3 原核细胞诱导蛋白质表达及多克隆抗体制备 | 第53-54页 |
| 2.2.4 用POP3抗体免疫沉淀和免疫复合物的胰酶酶解 | 第54-55页 |
| 2.2.5 HPLC-MS/MS | 第55页 |
| 2.2.6 免疫共沉淀 | 第55-56页 |
| 2.2.7 哺乳动物细胞双杂交 | 第56页 |
| 2.2.8 荧光素酶报告系统分析 | 第56-57页 |
| 2.2.9 凝胶阻滞(EMSA)实验 | 第57-58页 |
| 2.2.10 斑马鱼morpholino技术 | 第58-59页 |
| 2.2.11 斑马鱼整胚原位杂交 | 第59-61页 |
| 2.2.12 斑马鱼整胚抗体染色 | 第61-62页 |
| 2.3 结果 | 第62-90页 |
| 2.3.1 重组质粒的构建 | 第62-65页 |
| 2.3.2 POP3与ATF4的基因和蛋白结构分析 | 第65-69页 |
| 2.3.3 家族关系和进化分析 | 第69-70页 |
| 2.3.4 POP3抗体的制备 | 第70-71页 |
| 2.3.5 POP3的表达 | 第71-74页 |
| 2.3.5.1 POP3在鼠中的表达和定位 | 第71-72页 |
| 2.3.5.2 POP3在斑马鱼胚胎中的表达和定位 | 第72-74页 |
| 2.3.6 用斑马鱼morpholino敲减技术确定POP3的生物学功能 | 第74-80页 |
| 2.3.7 用斑马鱼morpholino技术鉴别POPDC家族的功能差异 | 第80-81页 |
| 2.3.8 免疫沉淀确定POP3的相互作用蛋白ATF4 | 第81-82页 |
| 2.3.9 POP3与ATF4相互作用的确定 | 第82-84页 |
| 2.3.10 利用morpholino敲减技术确定POP3与ATF4的相互作用 | 第84-86页 |
| 2.3.11 利用RNAi干扰C2C12细胞系确定POP3与ATF4的相互作用 | 第86页 |
| 2.3.12 POP3与ATF4相互作用调控GATA4启动子上的CRE位点 | 第86-90页 |
| 2.4 讨论 | 第90-93页 |
| 第三章 其它研究 | 第93-107页 |
| 3.1 ZNF480与ACTC1相互作用对肌生成的调控研究 | 第93-101页 |
| 3.1.1 材料与方法 | 第93-97页 |
| 3.1.1.1 常规实验材料与方法 | 第93页 |
| 3.1.1.2 RT-PCR引物 | 第93页 |
| 3.1.1.3 酵母双杂交 | 第93-95页 |
| 3.1.1.4 ZNF480转基因稳定表达C2C12细胞系的分化 | 第95页 |
| 3.1.1.5 免疫沉淀 | 第95-96页 |
| 3.1.1.6 胶内酶解和质谱分析 | 第96-97页 |
| 3.1.2 结果与讨论 | 第97-101页 |
| 3.1.2.1 质粒构建 | 第97页 |
| 3.1.2.2 酵母双杂交筛选与ZNF480相互作用的蛋白 | 第97-99页 |
| 3.1.2.3 ZNF480对C2C12分化的调控 | 第99-101页 |
| 3.2 人类心脏候选新基因C6orf142的克隆、表达及其转录活性的初步研究 | 第101-107页 |
| 3.2.1 材料与方法 | 第101-102页 |
| 3.2.1.1 常规实验材料与方法(同2.2) | 第101页 |
| 3.2.1.2 引物 | 第101-102页 |
| 3.2.1.3 细胞转染和荧光素酶分析 | 第102页 |
| 3.2.2 结果与讨论 | 第102-107页 |
| 3.2.2.1 C6orf142基因和质粒构建 | 第102-104页 |
| 3.2.2.2 RT-PCR | 第104-105页 |
| 3.2.2.3 转录活性分析 | 第105页 |
| 3.2.2.4 信号途径分析 | 第105-107页 |
| 第四章 结语 | 第107-110页 |
| 参考文献 | 第110-120页 |
| 附录一 | 第120-122页 |
| 附录二 | 第122-124页 |
| 致谢 | 第124-126页 |
