| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-27页 |
| 1.1 生物固氮概况 | 第11页 |
| 1.2 根瘤菌—豆科植物共生体系的作用机理及研究进展 | 第11-14页 |
| 1.3 根瘤菌中与结瘤固氮相关的基因 | 第14-17页 |
| 1.3.1 nif基因 | 第14-15页 |
| 1.3.2 fix基因 | 第15页 |
| 1.3.3 其它基因及基因间的相互作用 | 第15-17页 |
| 1.4 豆科植物中与结瘤固氮相关的基因 | 第17-21页 |
| 1.4.1 参与结瘤因子信号传导途径的基因 | 第17-19页 |
| 1.4.2 其它结瘤素基因 | 第19-21页 |
| 1.5 酵母双杂交系统 | 第21-23页 |
| 1.5.1 酵母双杂交的原理 | 第21-22页 |
| 1.5.2 酵母双杂交的特点 | 第22-23页 |
| 1.6 紫云英—华癸中慢生根瘤菌共生固氮体系研究进展 | 第23-25页 |
| 1.7 研究目的和意义 | 第25-27页 |
| 2 材料与方法 | 第27-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第27-30页 |
| 2.1.1 所用菌株和质粒 | 第27-28页 |
| 2.1.2 培养基 | 第28-29页 |
| 2.1.3 常用缓冲液及其它 | 第29-30页 |
| 2.1.4 抗生素 | 第30页 |
| 2.2 方法 | 第30-38页 |
| 2.2.1 紫云英盆栽 | 第31页 |
| 2.2.2 紫云英总RNA的抽提 | 第31-32页 |
| 2.2.3 AD-cDNA文库的构建 | 第32-36页 |
| 2.2.3.1 RT-PCR合成cDNA第一链 | 第32-33页 |
| 2.2.3.2 LD-PCR合成cDNA第二链 | 第33页 |
| 2.2.3.3 双链cDNA的纯化 | 第33-34页 |
| 2.2.3.4 酵母感受态的制备 | 第34页 |
| 2.2.3.5 将ds cDNA和pGADT7-Rec转化AH109感受态细胞 | 第34-35页 |
| 2.2.3.6 在SD/-Leu平板上筛选库转化子 | 第35页 |
| 2.2.3.7 收集库转化子 | 第35页 |
| 2.2.3.8 cDNA文库的检测 | 第35-36页 |
| 2.2.4 诱饵质粒的构建及检测 | 第36-37页 |
| 2.2.4.1 目标基因的克隆及载体构建 | 第36页 |
| 2.2.4.2 诱饵载体自激活活性及毒性的检测 | 第36-37页 |
| 2.2.4.3 滤纸平板影印 | 第37页 |
| 2.2.5 紫云英AD-cDNA文库的筛选 | 第37-38页 |
| 2.2.6 阳性克隆的分析 | 第38页 |
| 2.2.6.1 菌落PCR检测阳性克隆插入片段大小 | 第38页 |
| 2.2.6.2 阳性克隆酵母质粒的抽提 | 第38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-46页 |
| 3.1 紫云英总RNA和cDNA的质量 | 第38-40页 |
| 3.2 紫云英AD-cDNA文库库容量的鉴定 | 第40-42页 |
| 3.3 诱饵载体pGBKT7-AsB2510的构建 | 第42-43页 |
| 3.4 与Lb相互作用的阳性克隆筛选及鉴定 | 第43-44页 |
| 3.5 阳性克隆的验证和分析 | 第44-46页 |
| 4 总结与讨论 | 第46-52页 |
| 4.1 总结 | 第46-47页 |
| 4.2 讨论 | 第47-50页 |
| 4.2.1 cDNA文库质量的影响因素 | 第47-48页 |
| 4.2.2 诱饵基因的选择 | 第48-49页 |
| 4.2.3 关于Lb和靶蛋白互作的可能机制及其在共生固氮中的功能 | 第49-50页 |
| 4.3 进一步研究设想 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 论文发表情况 | 第63-64页 |
| 附录 | 第64页 |
