| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 引言 | 第8-14页 |
| 1. 自噬——从形态学研究到分子机制初探 | 第8-10页 |
| 2. 四膜虫的研究进展 | 第10-12页 |
| 3. 以四膜虫为模式生物的自噬相关研究 | 第12-14页 |
| 材料 | 第14-19页 |
| 1. 四膜虫细胞 | 第14页 |
| 2. 菌株和质粒 | 第14页 |
| 3. 培养基和主要试剂 | 第14-15页 |
| 4. 常用储存液及缓冲液 | 第15-16页 |
| 5. 仪器设备 | 第16-17页 |
| 6. 引物合成 | 第17-19页 |
| 方法 | 第19-33页 |
| 1. 细胞培养 | 第19页 |
| 1.1 细胞保存与培养 | 第19页 |
| 1.2 嗜热四膜虫细胞接合生殖培养 | 第19页 |
| 2. 细胞处理 | 第19-20页 |
| 2.1 过氧化氢处理 | 第19-20页 |
| 2.2 雷帕霉素处理 | 第20页 |
| 2.3 营养饥饿处理 | 第20页 |
| 3. 细胞学分析 | 第20-21页 |
| 3.1 细胞染色和激光共聚焦显微分析 | 第20页 |
| 3.2 细胞活性检测 | 第20-21页 |
| 3.3 细胞内总ATP检测 | 第21页 |
| 3.4 流式细胞仪检测细胞死亡 | 第21页 |
| 4. RT-PCR | 第21-22页 |
| 5. 蛋白质免疫印迹分析 | 第22页 |
| 6. 基因克隆及质粒构建 | 第22-29页 |
| 6.1 TtATG8基因克隆 | 第22-23页 |
| 6.2 EGFP-TtATG8质粒构建 | 第23-24页 |
| 6.3 pD5H8-EGFP-TtATG8和pD5H8-TtATG8转化质粒构建 | 第24-26页 |
| 6.4 基因敲除质粒MTT1-TtATG8构建 | 第26-29页 |
| 7. TtATG8片段的蛋白质表达纯化 | 第29页 |
| 8. 嗜热四膜虫的基因枪接合生殖转化和筛选 | 第29-31页 |
| 9. 照片处理与统计学分析方法 | 第31-33页 |
| 结果 | 第33-45页 |
| 1. TtATG8基因克隆 | 第33-35页 |
| 2. 载体构建与转化子鉴定 | 第35-37页 |
| 2.1 重组质粒pD5H8-TtATG8和pD5H8-EGFP-TtATG8转化子的鉴定 | 第35-36页 |
| 2.2 重组质粒MTT1-TtATG8的构建 | 第36-37页 |
| 3. TtATG8基因参与Tetrahymena thermophila细胞的自噬调控 | 第37-42页 |
| 3.1 雷帕霉素诱导自噬并增加TtATG8的表达 | 第37-40页 |
| 3.2 氧化刺激诱导自噬引起TtATG8表达水平上调 | 第40-41页 |
| 3.3 营养饥饿诱导自睡增加的表达 | 第41-42页 |
| 4. 过度表达TtATG8基因促进Tetrahymena thermophila细胞生存 | 第42-45页 |
| 4.1 雷帕霉素预处理可以防止饥饿引起的细胞死亡和ATP过度消耗 | 第42-44页 |
| 4.2 TtATG8基因过表达延长嗜热四膜虫细胞生存期 | 第44-45页 |
| 讨论 | 第45-49页 |
| 1. 细胞自噬的调控机制 | 第45-46页 |
| 2. TtATG8基因与嗜热四膜虫细胞自噬的关系 | 第46-47页 |
| 3. TtATG8基因与嗜热四膜虫细胞存活的关系 | 第47-48页 |
| 4. 嗜热四膜虫转基因方法和基因调控研究 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-53页 |
| 发表文章 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 附件 文献综述 | 第55-63页 |
| 参考文献 | 第61-63页 |
