| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略语表 | 第11-13页 |
| 1 前言 | 第13-23页 |
| 1.1 苏云金芽胞杆菌简介 | 第13-15页 |
| 1.2 苏云金素的介绍 | 第15页 |
| 1.3 苏云金素合成基因簇研究进展 | 第15-18页 |
| 1.4 非核糖体肽合成酶简介 | 第18-19页 |
| 1.5 糖基转移酶简介 | 第19-22页 |
| 1.6 本课题的研究意义 | 第22-23页 |
| 2 材料和方法 | 第23-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-29页 |
| 2.1.1 菌株,质粒和引物 | 第23-27页 |
| 2.1.2 培养基 | 第27页 |
| 2.1.3 试剂 | 第27-28页 |
| 2.1.4 仪器 | 第28-29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-36页 |
| 2.2.1 DNA常规操作 | 第29-31页 |
| 2.2.1.1 大肠杆菌质粒DNA提取 | 第29页 |
| 2.2.1.2 苏云金芽胞杆菌总DNA的提取 | 第29页 |
| 2.2.1.3 DNA的体外重组操作 | 第29-30页 |
| 2.2.1.4 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第30页 |
| 2.2.1.5 苏云金芽胞杆菌感受态细胞的制备和电转化 | 第30-31页 |
| 2.2.2 基因敲除载体质粒的构建 | 第31-32页 |
| 2.2.2.1 thu2基因敲除载体质粒的构建 | 第31-32页 |
| 2.2.2.2 thuF基因敲除载体质粒的构建 | 第32页 |
| 2.2.3 基因敲除突变体的筛选 | 第32页 |
| 2.2.4 基因的互补试验 | 第32-33页 |
| 2.2.5 蛋白质表达和纯化 | 第33-34页 |
| 2.2.5.1 基因表达载体质粒的构建 | 第33页 |
| 2.2.5.2 目的蛋白质的表达和纯化 | 第33-34页 |
| 2.2.5.3 蛋白质的SDS-PAGE | 第34页 |
| 2.2.6 苏云金素的分离纯化和HPLC检测 | 第34-35页 |
| 2.2.7 晶体和芽胞的显微镜观察 | 第35页 |
| 2.2.8 基因注释及序列分析 | 第35-36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-54页 |
| 3.1 Thu生物合成基因簇序列的进一步分析 | 第36-37页 |
| 3.2 基因thu2功能的分析 | 第37-48页 |
| 3.2.1 thu2基因的注释和生物信息学分析 | 第37页 |
| 3.2.2 thu2基因敲除载体的构建 | 第37-39页 |
| 3.2.3 thu2基因敲除突变体的筛选 | 第39-40页 |
| 3.2.4 thu2基因突变体的表型检测 | 第40-42页 |
| 3.2.5 thu2基因的互补试验 | 第42-43页 |
| 3.2.6 thu2基因的原核表达和蛋白质纯化 | 第43-47页 |
| 3.2.6.1 不同培养时间对蛋白Thu2表达的影响 | 第43-44页 |
| 3.2.6.2 不同IPTG浓度对蛋白Thu2表达的影响 | 第44-45页 |
| 3.2.6.3 不同诱导温度对蛋白Thu2表达的影响 | 第45-47页 |
| 3.2.7 体外分析Thu2的功能 | 第47-48页 |
| 3.3 基因thuF功能的分析 | 第48-54页 |
| 3.3.1 thuF基因的注释和生物信息学分析 | 第48-49页 |
| 3.3.2 thuF基因敲除载体的构建 | 第49-50页 |
| 3.3.3 thuF基因敲除突变体的筛选 | 第50-51页 |
| 3.3.4 thuF基因突变体的表型检测 | 第51-52页 |
| 3.3.5 thuF基因的互补试验 | 第52页 |
| 3.3.6 thuF基因的原核表达和蛋白质纯化 | 第52-53页 |
| 3.3.7 体外分析ThuF的功能 | 第53-54页 |
| 4 讨论 | 第54-56页 |
| 4.1 关于苏云金素合成基因簇 | 第54页 |
| 4.2 关于苏云金素的生物合成途径 | 第54-55页 |
| 4.3 关于苏云金素合成基因簇中基因的功能 | 第55-56页 |
| 5 总结 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 致谢 | 第63-65页 |
| 附录 | 第65页 |
