| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 第1章 绪论 | 第10-22页 |
| 1.1 天蓝色链霉菌概述 | 第10-12页 |
| 1.1.1 天蓝色链霉菌特性 | 第10页 |
| 1.1.2 天蓝色链霉菌形态分化与次级代谢调控研究 | 第10-11页 |
| 1.1.3 天蓝色链霉菌的次级代谢 | 第11-12页 |
| 1.2 LysR家族因子 | 第12-21页 |
| 1.2.1 LysR家族简介 | 第12-14页 |
| 1.2.3 LysR家族因子结构与功能 | 第14-17页 |
| 1.2.4 LTTR转录调控及自身调控 | 第17-20页 |
| 1.2.5 stgR简介与研究进展 | 第20-21页 |
| 1.3 本论文研究内容 | 第21-22页 |
| 第2章 stgR对形态分化和次级代谢的调控 | 第22-43页 |
| 2.1 引言 | 第22页 |
| 2.2 实验材料和方法 | 第22-36页 |
| 2.2.1 菌株和质粒 | 第22-23页 |
| 2.2.2 实验仪器和设备 | 第23-25页 |
| 2.2.3 培养基 | 第25-26页 |
| 2.2.4 主要试剂和溶液 | 第26页 |
| 2.2.5 链霉菌培养 | 第26页 |
| 2.2.6 主要PCR程序 | 第26-27页 |
| 2.2.7 天蓝色链霉菌基因组提取 | 第27页 |
| 2.2.8 大肠杆菌感受态细胞转化 | 第27-28页 |
| 2.2.9 切胶回收 | 第28页 |
| 2.2.10 PCR产物纯化 | 第28页 |
| 2.2.11 大肠杆菌质粒及柯斯质粒提取 | 第28-29页 |
| 2.2.12 天蓝色链霉菌结合转导实验 | 第29页 |
| 2.2.13 Southern blot实验 | 第29-31页 |
| 2.2.14 PCR-targeting基因敲除技术 | 第31-35页 |
| 2.2.14.1 用于敲除的基因片段的获得 | 第31-32页 |
| 2.2.14.2 设计长PCR引物 | 第32-33页 |
| 2.2.14.3 PCR扩增抗性敲除casette | 第33页 |
| 2.2.14.4 将cosmid Chat-6E11转化进入E.coli BW25113/PIJ790 | 第33页 |
| 2.2.14.5 PCR targeting of the S.coelicolor cosmid | 第33-34页 |
| 2.2.14.6 结合转导 | 第34页 |
| 2.2.14.7 单交换的验证及传代 | 第34页 |
| 2.2.14.8 双交换突变株验证 | 第34-35页 |
| 2.2.15 构建PL8990 stgR高拷贝菌株 | 第35页 |
| 2.2.16 敲除株与野生型,回补及高拷贝株形态发育比较 | 第35-36页 |
| 2.2.17 敲除株与野生型,高拷贝株Act及Red产量比较 | 第36页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第36-42页 |
| 2.3.1 基因敲除的验证 | 第36-38页 |
| 2.3.2 stgR高拷贝株的构建 | 第38页 |
| 2.3.3 stgR敲除株与天蓝色链霉菌野生型的表型比较 | 第38-40页 |
| 2.3.4 敲除株与野生型的抗生素产量比较 | 第40-42页 |
| 2.4 本章小结 | 第42-43页 |
| 第3章 stgR基因表达分析与自身调控初步研究 | 第43-57页 |
| 3.1 引言 | 第43页 |
| 3.2 材料和方法 | 第43-50页 |
| 3.2.1 菌株和质粒 | 第43-44页 |
| 3.2.2 化学试剂 | 第44页 |
| 3.2.3 总RNA的提取 | 第44页 |
| 3.2.4 荧光定量PCR | 第44-47页 |
| 3.2.4.1 RNA中DNA消解 | 第44-45页 |
| 3.2.4.2 实时荧光定量PCR | 第45-46页 |
| 3.2.4.3 荧光定量PCR实验结果分析 | 第46-47页 |
| 3.2.5 构建包含pIJ8630-stgRp的野生型及敲除株 | 第47页 |
| 3.2.6 Western blotting检测报告基因EGFP表达 | 第47-48页 |
| 3.2.7 StgR蛋白的克隆与表达纯化 | 第48-50页 |
| 3.2.7.1 表达载体pGEX-2p-stgR和pET-28a-stgR的构建 | 第48-49页 |
| 3.2.7.2 BL21(DE3)诱导表达目的蛋白 | 第49-50页 |
| 3.3 结果和讨论 | 第50-55页 |
| 3.3.1 野生型和缺失株总RNA抽提 | 第50页 |
| 3.3.2 cDNA对照反应 | 第50-51页 |
| 3.3.3 荧光定量实验结果 | 第51-52页 |
| 3.3.4 pIJ8630-stgRp在野生型和缺失株中表达实验结果 | 第52-54页 |
| 3.3.5 表达载体pGEX-2P-stgR和pET-28a-stgR的构建与蛋白纯化 | 第54-55页 |
| 3.4 本章小结 | 第55-57页 |
| 第4章 结论与展望 | 第57-59页 |
| 4.1 本实验研究结果及意义 | 第57-58页 |
| 4.1.1 stgR是一个负调控的LTTR家族因子 | 第57页 |
| 4.1.2 stgR对于自身具有负调控作用 | 第57-58页 |
| 4.2 展望 | 第58-59页 |
| 缩略表 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
