| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略语表 | 第11-13页 |
| 1 前言 | 第13-32页 |
| 1.1 苏云金芽胞杆菌简介 | 第13-16页 |
| 1.2 苏云金素研究进展 | 第16-20页 |
| 1.2.1 苏云金素简介 | 第16-17页 |
| 1.2.2 苏云金素合成和分泌的研究进展 | 第17-20页 |
| 1.3 Ⅳ型分泌系统简介 | 第20-24页 |
| 1.3.1 Ⅳ型分泌系统的分类 | 第21页 |
| 1.3.2 Ⅳ型分泌系统的组成蛋白 | 第21-23页 |
| 1.3.3 Ⅳ型分泌系统的组装过程 | 第23-24页 |
| 1.4 细菌转运子(Transporters)简介 | 第24-28页 |
| 1.5 S-腺苷甲硫氨酸合成酶简介 | 第28-30页 |
| 1.6 本课题的研究意义 | 第30-32页 |
| 2 材料和方法 | 第32-49页 |
| 2.1 实验材料 | 第32-41页 |
| 2.1.1 菌株、质粒、引物 | 第32-38页 |
| 2.1.2 培养基 | 第38-39页 |
| 2.1.3 试剂 | 第39-40页 |
| 2.1.4 仪器 | 第40-41页 |
| 2.2 实验方法 | 第41-49页 |
| 2.2.1 DNA常规操作 | 第41-43页 |
| 2.2.2 基因敲除载体的构建方法 | 第43-44页 |
| 2.2.3 基因敲除突变体的筛选 | 第44-45页 |
| 2.2.4 蛋白质纯化和表达 | 第45-46页 |
| 2.2.5 苏云金素的分离纯化和HPLC检测 | 第46-47页 |
| 2.2.6 胞内代谢物的制备 | 第47页 |
| 2.2.7 苏云金素以及前体物的HPLC-Q-TOF液质联用检测 | 第47-48页 |
| 2.2.8 序列分析软件及网站 | 第48-49页 |
| 3 结果与分析 | 第49-77页 |
| 3.1 基因thuT功能的研究 | 第49-62页 |
| 3.1.1 thuT基因的生物信息学分析 | 第49-50页 |
| 3.1.2 thuT基因敲除载体的构建 | 第50-51页 |
| 3.1.3 thuT基因同框缺失突变体的筛选和验证 | 第51-53页 |
| 3.1.4 thuT基因同框缺失突变体的表型检测 | 第53-55页 |
| 3.1.5 thuT基因同框缺失突变体的前提物的检测 | 第55-56页 |
| 3.1.6 thuT基因的原核表达和纯化 | 第56-58页 |
| 3.1.7 thuT基因的功能分析 | 第58-62页 |
| 3.2 基因virB4-1、virB4-2、virB11功能的研究 | 第62-67页 |
| 3.2.1 基因virB4-1、virB4-2、virB11的生物信息学分析 | 第62页 |
| 3.2.2 基因virB4-1、virB4-2、virB11敲除载体的构建 | 第62-65页 |
| 3.2.3 基因virB4-2敲除突变体的筛选和验证 | 第65-66页 |
| 3.2.4 基因virB4-2敲除突变体的表型检测 | 第66-67页 |
| 3.3 基因thu1功能的初步研究 | 第67-73页 |
| 3.3.1 thu1基因的生物信息学分析 | 第67-68页 |
| 3.3.2 thu1基因敲除载体的构建 | 第68页 |
| 3.3.3 thu1基因同框缺失突变体的筛选和验证 | 第68-70页 |
| 3.3.4 thu1基因同框缺失突变体的表型检测 | 第70-72页 |
| 3.3.5 thu1基因的原核表达和蛋白质纯化 | 第72页 |
| 3.3.6 thu1基因的体外功能分析 | 第72-73页 |
| 3.4 基因thuF互补实验 | 第73-77页 |
| 3.4.1 thuF基因互补载体的构建 | 第73-74页 |
| 3.4.2 thuF基因互补突变体的筛选和验证 | 第74-75页 |
| 3.4.3 thuF基因回补突变体的表型检测 | 第75-77页 |
| 4 讨论 | 第77-80页 |
| 4.1 关于苏云金素合成的体外重建 | 第77-78页 |
| 4.2 关于苏云金素分泌机理的研究 | 第78-79页 |
| 4.3 关于苏云金素基因簇内部其它基因的功能研究 | 第79页 |
| 4.4 关于CT43高毒力菌株其他抗生素的研究 | 第79-80页 |
| 总结 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
