| 致谢 | 第4-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述及立项意义 | 第11-42页 |
| 1 木聚糖酶 | 第11-28页 |
| 1.1 木聚糖酶的分类及序列特征 | 第11-15页 |
| 1.2 木聚糖酶的酶学特性 | 第15-17页 |
| 1.3 木聚糖酶的分子结构及催化特点 | 第17-23页 |
| 1.4 木聚糖酶基因的克隆及表达 | 第23-25页 |
| 1.5 木聚糖酶基因的蛋白质工程技术改造 | 第25-26页 |
| 1.6 木聚糖酶的生产 | 第26-27页 |
| 1.7 木聚糖酶的应用现状 | 第27-28页 |
| 2 小麦中木聚糖酶抑制蛋白对木聚糖酶的抑制作用 | 第28-40页 |
| 2.1 不同谷物中木聚糖酶抑制蛋白的含量 | 第28-29页 |
| 2.2 谷物中木聚糖酶抑制蛋白的生理作用 | 第29-30页 |
| 2.3 木聚糖酶抑制蛋白对不同物种来源木聚糖酶的抑制作用 | 第30-32页 |
| 2.4 木聚糖酶抑制蛋白的分子结构及对木聚糖酶的抑制机理 | 第32-39页 |
| 2.5 木聚糖酶抑制蛋白对木聚糖酶应用的不利影响 | 第39-40页 |
| 3 本课题的立项依据、研究意义及拟采取的技术路线 | 第40-42页 |
| 3.1 本课题的立项依据 | 第40页 |
| 3.2 本课题的研究意义 | 第40-41页 |
| 3.3 本课题的技术路线 | 第41-42页 |
| 第二章 小麦籽粒中木聚糖酶抑制蛋白的纯化及抑制性质 | 第42-54页 |
| 1 引言 | 第42页 |
| 2 材料 | 第42页 |
| 3 试验方法 | 第42-45页 |
| 3.1 谷物籽粒中粗蛋白的提取 | 第42页 |
| 3.2 谷物不同部位粗蛋白的提取 | 第42-43页 |
| 3.3 小麦木聚糖酶抑制蛋白的提取与纯化 | 第43页 |
| 3.4 相对分子质量的测定 | 第43页 |
| 3.5 蛋白质含量测定 | 第43-44页 |
| 3.6 木聚糖酶的制备 | 第44页 |
| 3.7 木聚糖酶活力的测定 | 第44页 |
| 3.8 木聚糖酶抑制活力的测定 | 第44-45页 |
| 3.9 木聚糖酶抑制蛋白抑制性质的测定 | 第45页 |
| 4 结果与分析 | 第45-52页 |
| 4.1 不同谷物中木聚糖酶及抑制蛋白的活性 | 第45-46页 |
| 4.2 谷物不同部位木聚糖酶及木聚糖酶抑制蛋白的分布 | 第46-47页 |
| 4.3 不同品种小麦中木聚糖酶抑制蛋白的活力 | 第47-48页 |
| 4.4 小麦木聚糖酶抑制蛋白的纯化 | 第48-50页 |
| 4.5 木聚糖酶抑制蛋白的最适抑制温度 | 第50页 |
| 4.6 木聚糖酶抑制蛋白的温度稳定性 | 第50-51页 |
| 4.7 木聚糖酶抑制蛋白的最适抑制时间 | 第51页 |
| 4.8 木聚糖酶抑制蛋白的抑制谱 | 第51-52页 |
| 5 小结 | 第52页 |
| 6 讨论 | 第52-54页 |
| 第三章 小麦XIP木聚糖酶抑制蛋白基因的克隆、表达及抑制性质 | 第54-67页 |
| 1 引言 | 第54页 |
| 2 实验材料 | 第54-55页 |
| 2.1 小麦、菌株及质粒 | 第54页 |
| 2.2 试剂 | 第54-55页 |
| 2.3 酵母培养基 | 第55页 |
| 3 试验方法 | 第55-57页 |
| 3.1 xip基因的克隆与表达 | 第55-56页 |
| 3.2 木聚糖酶的表达和纯化 | 第56页 |
| 3.3 电泳 | 第56页 |
| 3.4 木聚糖酶抑制蛋白的质谱鉴定 | 第56页 |
| 3.5 总蛋白浓度的测定 | 第56页 |
| 3.6 抑制蛋白的性质 | 第56-57页 |
| 4 结果与分析 | 第57-65页 |
| 4.1 小麦不同生育期叶和籽粒中木聚糖酶抑制活性的变化 | 第57-58页 |
| 4.2 小麦xip基因的克隆及序列分析 | 第58-60页 |
| 4.3 XIP-9023蛋白在毕赤酵母中重组表达 | 第60-61页 |
| 4.4 XIP-9023抑制蛋白对木聚糖酶的抑制性质 | 第61-65页 |
| 4.5 XIP-9023抑制蛋白对不同来源木聚糖酶的抑制谱 | 第65页 |
| 5 小结 | 第65页 |
| 6 讨论 | 第65-67页 |
| 第四章 XIP抑制蛋白的抗性木聚糖酶突变体构建及筛选 | 第67-87页 |
| 1 引言 | 第67页 |
| 2 试验材料 | 第67-68页 |
| 2.1 菌株与质粒 | 第67页 |
| 2.2 培养基 | 第67-68页 |
| 3 试验方法 | 第68-70页 |
| 3.1 目的基因的获得 | 第68-69页 |
| 3.2 木聚糖酶阳性转化子的筛选 | 第69页 |
| 3.3 木聚糖酶基因的原核表达及亲和吸附纯化 | 第69-70页 |
| 3.4 小麦木聚糖酶抑制蛋白xip-9023在毕赤酵母的表达 | 第70页 |
| 3.5 木聚糖酶抑制蛋白抑制率的测定 | 第70页 |
| 4 结果与分析 | 第70-85页 |
| 4.1 GH10木聚糖酶中与XIP抑制蛋白结合关键位点突变体的获得及性质研究 | 第70-75页 |
| 4.1.1 突变体位点的确定 | 第70-72页 |
| 4.1.2 抗XIP木聚糖酶突变体的构建 | 第72-74页 |
| 4.1.3 GH10木聚糖酶突变体基因的诱导表达 | 第74-75页 |
| 4.2 GH10木聚糖酶中与XIP抑制蛋白结合非关键氨基酸位点突变体的获得及性质研究 | 第75-77页 |
| 4.2.1 GH10木聚糖酶突变位点的确定 | 第75-76页 |
| 4.2.2 GH10木聚糖酶与XIP抑制蛋白相互作用非关键作用位点突变体的的获得及性质研究 | 第76-77页 |
| 4.3 抑制率降低的突变酶的纯化 | 第77-78页 |
| 4.4 等摩尔数比例下XIP抑制蛋白对突变酶的抑制率 | 第78页 |
| 4.5 黑曲霉与细菌、植物GH10木聚糖酶的序列比对及第4及第7模块的确定 | 第78-82页 |
| 4.6 GH10木聚糖酶突变基因的获得及诱导表达、木聚糖酶活力测定 | 第82-85页 |
| 5 小结 | 第85页 |
| 6 讨论 | 第85-87页 |
| 第五章 XIP抑制蛋白的抗性木聚糖酶的筛选及性质 | 第87-99页 |
| 1 引言 | 第87页 |
| 2 材料与方法 | 第87-89页 |
| 2.1 菌株及商品化木聚糖酶产品 | 第87页 |
| 2.2 产酶培养基及产酶条件 | 第87-88页 |
| 2.3 木聚糖酶活力及木聚糖酶抑制蛋白活力测定方法 | 第88页 |
| 2.4 木聚糖酶酶学性质的测定 | 第88页 |
| 2.5 抗性木聚糖酶蛋白的纯化 | 第88页 |
| 2.6 抗性木聚糖酶的质谱鉴定 | 第88-89页 |
| 3 结果与分析 | 第89-97页 |
| 3.1 商品化木聚糖酶中抗性木聚糖酶的筛选 | 第89页 |
| 3.2 产抗性木聚糖酶微生物的筛选 | 第89页 |
| 3.3 抗性木聚糖酶的纯化 | 第89-90页 |
| 3.4 抗性木聚糖酶的质谱鉴定 | 第90-91页 |
| 3.5 抗性木聚糖酶基因的克隆和表达 | 第91-92页 |
| 3.6 重组抗性木聚糖酶XYN3的性质 | 第92-93页 |
| 3.7 抗性木聚糖酶XYN3氨基酸序列特征的分析 | 第93-95页 |
| 3.8 抗性木聚糖酶XYN3的进化分析 | 第95-97页 |
| 4 小结 | 第97-98页 |
| 5 讨论 | 第98-99页 |
| 第六章 XIP抑制蛋白对不同比例小麦玉米混合料中外加木聚糖酶的影响 | 第99-110页 |
| 1 引言 | 第99页 |
| 2 试验材料 | 第99页 |
| 3 试验方法 | 第99-100页 |
| 3.1 不同比例的小麦玉米混合料中添加木聚糖酶试验 | 第99页 |
| 3.2 猪胃消化液对小麦玉米混合物外加木聚糖酶的影响 | 第99页 |
| 3.3 不同比例的小麦玉米混合料加酶反应产物中总还原糖的测定 | 第99-100页 |
| 3.4 不同比例的小麦玉米混合料加酶反应产物中木糖和木二糖的测定 | 第100页 |
| 3.5 不同比例的小麦玉米混合料中木聚糖酶抑制蛋白活力的测定 | 第100页 |
| 4 结果与分析 | 第100-108页 |
| 4.1 黑曲霉GH11敏感木聚糖酶的酶学性质 | 第100-102页 |
| 4.2 不同比例小麦的抑制蛋白的活力 | 第102-103页 |
| 4.3 抗性木聚糖酶XYN3在42℃反应对不同比例小麦玉米混合料总还原糖的影响 | 第103-104页 |
| 4.4 抗性木聚糖酶XYN3在39℃下对不同比例小麦玉米混合料产生总还原糖的影响 | 第104页 |
| 4.5 不同比例小麦酶解产糖的HPLC分析 | 第104-107页 |
| 4.6 猪消化液的添加对小麦加酶产生还原糖的影响 | 第107-108页 |
| 5 小结 | 第108页 |
| 6 讨论 | 第108-110页 |
| 6.1 不同性质的敏感性木聚糖酶对小麦应用效果的影响 | 第108页 |
| 6.2 小麦中抑制蛋白种类与不同含量对木聚糖酶应用效果的影响 | 第108-109页 |
| 6.3 不同反应温度对小麦玉米混合料加酶效果的影响 | 第109页 |
| 6.4 木聚糖酶的稳定性对于催化效果的影响 | 第109-110页 |
| 全文结论与讨论 | 第110-114页 |
| 1、讨论 | 第110-111页 |
| 2、结论 | 第111-114页 |
| 本文创新点 | 第114-115页 |
| 参考文献 | 第115-127页 |
| ABSTRACT | 第127-128页 |
| 在学期间的研究成果及发表的学术论文 | 第129页 |
