| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 英文缩略表 | 第13-15页 |
| 第一章 引言 | 第15-31页 |
| 1.1 新城疫病毒概述 | 第15-16页 |
| 1.2 炎症小体 | 第16-25页 |
| 1.2.1 炎症小体概述 | 第16-18页 |
| 1.2.2 炎症小体类型 | 第18-25页 |
| 1.2.2.1 NLRP1炎症小体 | 第18-19页 |
| 1.2.2.2 常规NLRP3炎症小体 | 第19-20页 |
| 1.2.2.3 非常规NLRP3炎症小体 | 第20-22页 |
| 1.2.2.4 NLRC4炎症小体 | 第22-23页 |
| 1.2.2.5 NLRP6和NLRP12炎症小体 | 第23页 |
| 1.2.2.6 AIM2和IFI16炎症小体 | 第23-25页 |
| 1.2.2.7 pyrin炎症小体 | 第25页 |
| 1.3 炎性小体与病毒 | 第25-30页 |
| 1.3.1 ALR与病毒 | 第25-26页 |
| 1.3.2 NLRP3炎症小体与病毒 | 第26-28页 |
| 1.3.3 RLR与病毒 | 第28页 |
| 1.3.4 病毒调控炎症小体 | 第28-29页 |
| 1.3.5 总结 | 第29-30页 |
| 1.4 本研究的目的及意义 | 第30-31页 |
| 第二章 新城疫病毒激活NLRP3炎症小体 | 第31-44页 |
| 2.1 材料和方法 | 第32-37页 |
| 2.1.1 病毒和细胞系 | 第32页 |
| 2.1.2 小鼠 | 第32页 |
| 2.1.3 抗体与试剂 | 第32-33页 |
| 2.1.4 主要试剂的配制 | 第33页 |
| 2.1.5 主要仪器 | 第33页 |
| 2.1.6 病毒灭活 | 第33页 |
| 2.1.7 THP-1 细胞分化为巨噬细胞 | 第33-34页 |
| 2.1.8 荧光定量PCR检查NDV感染后炎症小体相关分子的mRNA水平 | 第34-35页 |
| 2.1.9 ELISA检查NDV感染THP-1 细胞上清中IL-1β 含量 | 第35页 |
| 2.1.10 Western-blot检查炎症小体组分 | 第35页 |
| 2.1.11 表达shRNA的慢病毒包装 | 第35-37页 |
| 2.1.12 稳定表达shRNA的细胞系的构建 | 第37页 |
| 2.1.13 诱导骨髓来源巨噬细胞 | 第37页 |
| 2.2 结果 | 第37-43页 |
| 2.2.1 THP-1 细胞诱导为巨噬细胞 | 第37-38页 |
| 2.2.2 THP-1 干扰细胞系的构建 | 第38页 |
| 2.2.3 荧光定量PCR检查炎症小体组分mRNA表达情况 | 第38-39页 |
| 2.2.4 NDV刺激PMA诱导的THP-1 细胞分泌IL-1β | 第39-40页 |
| 2.2.5 WB检查NDV感染后Caspase-1 和IL-1β 活化情况 | 第40-41页 |
| 2.2.6 Caspase-1 抑制剂抑制NDV诱导的IL-1β 分泌 | 第41页 |
| 2.2.7 NDV激活NLRP3炎症小体 | 第41-42页 |
| 2.2.8 NDV感染BMDM激活NLRP3炎症小体 | 第42-43页 |
| 2.3 讨论 | 第43-44页 |
| 第三章 NLRP3炎症小体活化对新城疫病毒复制的影响 | 第44-52页 |
| 3.1 材料和方法 | 第45-46页 |
| 3.1.1 病毒和细胞系 | 第45页 |
| 3.1.2 抗体和试剂 | 第45页 |
| 3.1.3 主要缓冲液及试剂的配制 | 第45页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第45-46页 |
| 3.1.5 细胞活性检测 | 第46页 |
| 3.1.6 病毒TCID50测定 | 第46页 |
| 3.1.7 利用CRISRP/Cas9技术构建敲除GSDMD基因的THP-1 细胞系 | 第46页 |
| 3.2 结果 | 第46-51页 |
| 3.2.1 NDV感染细胞死亡情况 | 第46-48页 |
| 3.2.2 shRNA干扰NLRP3炎症小体组分对病毒复制的影响 | 第48页 |
| 3.2.3 Caspase酶抑制剂处理对NDV复制的影响 | 第48-49页 |
| 3.2.4 NDV感染诱导GSDMD剪切 | 第49页 |
| 3.2.5 病毒感染敲除GSDMD细胞系IL-1β 分泌量下降 | 第49-50页 |
| 3.2.7 敲除GSDMD有利于NDV复制 | 第50-51页 |
| 3.3 讨论 | 第51-52页 |
| 第四章 新城疫病毒蛋白与NLRP3炎症小体 | 第52-63页 |
| 4.1 材料和方法 | 第53-56页 |
| 4.1.1 病毒和细胞系 | 第53页 |
| 4.1.2 抗体与试剂 | 第53页 |
| 4.1.3 主要缓冲液及试剂的配制 | 第53页 |
| 4.1.4 主要仪器 | 第53-54页 |
| 4.1.5 在THP-1 细胞中扩增人ASC，pro-IL-1β 和pro-Caspase-1 基因 | 第54页 |
| 4.1.6 相关真核表达质粒构建 | 第54-55页 |
| 4.1.7 稳定表达目的蛋白的THP-1 和 293T细胞系构建 | 第55-56页 |
| 4.1.8 检查LPS+ATP激活NLRP3炎症小体，病毒蛋白对其影响 | 第56页 |
| 4.1.9 在 293T细胞中重建NLRP3炎症小体 | 第56页 |
| 4.1.10 间接免疫荧光检查NLRP3和ASC与病毒蛋白亚细胞共定位 | 第56页 |
| 4.2 结果 | 第56-61页 |
| 4.2.1 病毒蛋白对LPS+ATP激活的NLRP3炎症小体的影响 | 第56-57页 |
| 4.2.2 在 293T细胞中重建NLRP3炎症小体 | 第57-58页 |
| 4.2.3 NP、P、V和W对重建NLRP3炎症小体的影响 | 第58-59页 |
| 4.2.4 间接免疫荧光检查NLRP3和ASC与病毒蛋白共定位 | 第59-61页 |
| 4.3 讨论 | 第61-63页 |
| 第五章 全文结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 作者简历 | 第76页 |
