| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 引言 | 第15-28页 |
| 1.1 植物雄性不育概述 | 第16-17页 |
| 1.1.1 植物雄性不育类型 | 第16页 |
| 1.1.2 植物雄性不育细胞生物学研究进展 | 第16页 |
| 1.1.3 植物雄性不育分子生物学研究进展 | 第16-17页 |
| 1.2 苜蓿雄性不育研究现状 | 第17-18页 |
| 1.2.1 国外苜蓿雄性不育研究进展 | 第17页 |
| 1.2.2 国内苜蓿雄性不育研究进展 | 第17-18页 |
| 1.2.3 苜蓿雄性不育类型 | 第18页 |
| 1.3 U-box蛋白在植物中的功能 | 第18-23页 |
| 1.3.1 植物泛素化系统 | 第18-20页 |
| 1.3.2 U-box蛋白的特点 | 第20页 |
| 1.3.3 U-box蛋白在植物中的作用 | 第20-22页 |
| 1.3.4 U-box蛋白在KEGG通路中的模式研究 | 第22-23页 |
| 1.4 绒毡层细胞与雄性不育研究进展 | 第23-25页 |
| 1.4.1 花药壁结构和绒毡层 | 第23-24页 |
| 1.4.2 绒毡层发育阶段划分 | 第24-25页 |
| 1.5 基因家族研究进展 | 第25页 |
| 1.5.1 基因家族 | 第25页 |
| 1.5.2 基因家族研究进展 | 第25页 |
| 1.6 研究目的和技术路线 | 第25-28页 |
| 1.6.1 研究目的 | 第25-27页 |
| 1.6.2 技术路线 | 第27-28页 |
| 第二章 蒺藜苜蓿U-box基因cDNA序列克隆及生物信息学分析 | 第28-57页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-29页 |
| 2.1.1 供试植物 | 第28页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第28页 |
| 2.1.3 菌株和载体 | 第28页 |
| 2.1.4 培养基配制 | 第28页 |
| 2.1.5 溶液配制 | 第28-29页 |
| 2.1.6 引物合成 | 第29页 |
| 2.2 试验方法 | 第29-35页 |
| 2.2.1 植物总RNA提取 | 第29-30页 |
| 2.2.2 反转录cDNA第一链合成 | 第30页 |
| 2.2.3 引物设计与合成 | 第30页 |
| 2.2.4 基因扩增 | 第30-31页 |
| 2.2.5 胶回收 | 第31-32页 |
| 2.2.6 pMD~R18-T载体连接反应体系及反应条件 | 第32页 |
| 2.2.7 基因转化至感受态细胞 | 第32页 |
| 2.2.8 提取质粒 | 第32-33页 |
| 2.2.9 酶切鉴定 | 第33-35页 |
| 2.2.10 蒺藜苜蓿MtPUB基因序列的生物信息学分析 | 第35页 |
| 2.3 结果与分析 | 第35-55页 |
| 2.3.1 总RNA提取及质量检测 | 第35-36页 |
| 2.3.2 蒺藜苜蓿U-box基因全长cDNA的克隆 | 第36页 |
| 2.3.3 蒺藜苜蓿U-box基因的生物信息学分析 | 第36-55页 |
| 2.4 讨论 | 第55-57页 |
| 第三章 蒺藜苜蓿MtPUB基因表达量分析 | 第57-64页 |
| 3.1 材料与方法 | 第57-59页 |
| 3.1.1 实验材料和主要试剂 | 第57页 |
| 3.1.2 处理条件 | 第57页 |
| 3.1.3 实验方法 | 第57-59页 |
| 3.2 结果与分析 | 第59-62页 |
| 3.2.1 蒺藜苜蓿MtPUB基因在根、茎、叶、花、荚果中的表达量分析 | 第59-60页 |
| 3.2.2 蒺藜苜蓿MtPUB基因在各种胁迫条件下的表达量分析 | 第60-62页 |
| 3.3 讨论 | 第62-64页 |
| 第四章 蒺藜苜蓿MtPUB基因原核表达分析 | 第64-73页 |
| 4.1 实验材料 | 第64页 |
| 4.1.1 菌株和质粒 | 第64页 |
| 4.1.2 酶和试剂 | 第64页 |
| 4.2 实验方法 | 第64-67页 |
| 4.2.1 载体构建 | 第64-66页 |
| 4.2.2 蛋白小量诱导 | 第66-67页 |
| 4.3 结果与分析 | 第67-71页 |
| 4.3.1 蒺藜苜蓿MtPUB基因的原核表达载体构建 | 第67-68页 |
| 4.3.2 蒺藜苜蓿MtPUB基因的诱导表达 | 第68-71页 |
| 4.4 讨论 | 第71-73页 |
| 第五章 MtPUB基因对拟南芥的转化研究 | 第73-92页 |
| 5.1 实验材料 | 第73-74页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第73页 |
| 5.1.2 质粒和菌株 | 第73页 |
| 5.1.3 试剂和酶类 | 第73页 |
| 5.1.4 培养基配制 | 第73-74页 |
| 5.1.5 引物合成和测序 | 第74页 |
| 5.2 实验方法 | 第74-80页 |
| 5.2.1 拟南芥突变体种植 | 第74页 |
| 5.2.2 拟南芥总基因组DNA提取 | 第74页 |
| 5.2.3 琼脂糖凝胶电泳 | 第74页 |
| 5.2.4 突变体筛选引物序列及引物合成 | 第74-75页 |
| 5.2.5 突变体PCR反应体系及反应条件 | 第75页 |
| 5.2.6 植物表达载体构建 | 第75-77页 |
| 5.2.7 植物表达载体构建CaCl_2法制备农杆菌感受态细胞 | 第77-78页 |
| 5.2.8 质粒转化EHA105农杆菌感受态细胞 | 第78页 |
| 5.2.9 拟南芥蘸花侵染法 | 第78-79页 |
| 5.2.10 转基因植物DNA提取 | 第79页 |
| 5.2.11 转基因植物的PCR检测 | 第79页 |
| 5.2.12 转基因植株的RT-PCR检测 | 第79-80页 |
| 5.2.13 转基因植株的花粉观测 | 第80页 |
| 5.3 结果与分析 | 第80-89页 |
| 5.3.1 DNA检测结果 | 第80-81页 |
| 5.3.2 PCR扩增结果 | 第81-82页 |
| 5.3.4 表达载体构建结果 | 第82-86页 |
| 5.3.5 农杆菌转化及阳性鉴定 | 第86-87页 |
| 5.3.6 转基因拟南芥植株 | 第87页 |
| 5.3.7 转基因拟南芥植株和野生型植株的形态比较 | 第87-88页 |
| 5.3.8 转基因植株的分子检测 | 第88-89页 |
| 5.4 讨论 | 第89-92页 |
| 第六章 蒺藜苜蓿MtPUB基因结构与进化生物信息分析 | 第92-110页 |
| 6.1 材料与方法 | 第92-95页 |
| 6.1.1 蒺藜苜蓿数据库和筛选基因 | 第92-93页 |
| 6.1.2 蒺藜苜蓿MtPUB相关基因蛋白结构域及其结构位点分析 | 第93页 |
| 6.1.3 蒺藜苜蓿MtPUB相关基因的系统发育分析 | 第93页 |
| 6.1.4 蒺藜苜蓿MtPUB及近缘物种PUB蛋白的多序列比对分析 | 第93-94页 |
| 6.1.5 蒺藜苜蓿MtPUB基因的功能歧化分析 | 第94页 |
| 6.1.6 蒺藜苜蓿MtPUB基因进化分析 | 第94-95页 |
| 6.2 结果分析 | 第95-108页 |
| 6.2.1 同源序列搜索 | 第95-96页 |
| 6.2.2 蒺藜苜蓿MtPUB蛋白结构域及结构位点分析 | 第96-99页 |
| 6.2.3 蒺藜苜蓿MtPUB相关基因系统发育分析 | 第99-102页 |
| 6.2.4 蒺藜苜蓿MtPUB相关基因片段的多序列联配分析 | 第102-104页 |
| 6.2.5 蒺藜苜蓿MtPUB相关基因功能歧化分析 | 第104-105页 |
| 6.2.6 蒺藜苜蓿MtPUB基因进化分析结果 | 第105-108页 |
| 6.3 讨论 | 第108-110页 |
| 第七章 结论与展望 | 第110-112页 |
| 7.1 研究结论 | 第110-111页 |
| 7.2 研究创新点 | 第111页 |
| 7.3 后续工作及展望 | 第111-112页 |
| 参考文献 | 第112-121页 |
| 附录 | 第121-124页 |
| 致谢 | 第124-125页 |
| 作者简历 | 第125页 |
