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血管生成素样蛋白7的促炎功能研究

摘要第8-9页
Abstract第9页
缩略语第10-14页
1 前言第14-37页
    1.1 炎症第14-15页
        1.1.1 炎症引起的氧化应激第14-15页
    1.2 巨噬细胞第15-22页
        1.2.1 巨噬细胞与人类健康第17-19页
        1.2.2 巨噬细胞中的炎症通路第19-22页
    1.3 Angptls蛋白家族第22-29页
        1.3.1 Angptls与血管生成第22-24页
        1.3.2 Angptls与甘油三酯代谢第24-25页
        1.3.3 Angptls与胰岛素抵抗第25-27页
        1.3.4 Angptls与癌症第27-28页
        1.3.5 Angptls与炎症第28-29页
    1.4 Angptl7第29-36页
        1.4.1 Angptl7与角膜形态第31-32页
        1.4.2 Angptl7与血管生成第32-33页
        1.4.3 Angptl7与青光眼第33-35页
        1.4.4 Angptl7与癌症第35-36页
    1.5 研究目的与意义第36-37页
2 实验材料与试剂第37-41页
    2.1 实验材料第37页
        2.1.1 动物材料第37页
        2.1.2 细胞材料第37页
        2.1.3 载体和质粒第37页
        2.1.4 菌株第37页
    2.2 主要仪器、试剂及溶液配制第37-41页
        2.2.1 主要仪器第37-39页
        2.2.2 主要试剂配制第39页
        2.2.3 主要试剂及试剂盒第39-41页
3 实验方法第41-58页
    3.1 动物实验第41页
    3.2 总RNA提取、纯化、鉴定和反转录第41-44页
        3.2.1 总RNA提取第41-42页
        3.2.2 总RNA纯化第42-43页
        3.2.3 总RNA鉴定第43页
        3.2.4 总RNA反转录第43-44页
    3.3 基因片段扩增、纯化、酶切、表达载体构建和测序第44-47页
        3.3.1 小鼠Angptl7基因片段扩增第44-45页
        3.3.2 小鼠Angptl7基因片段扩增产物检测、纯化与酶切第45页
        3.3.3 小鼠Angptl7基因片段载体构建第45-47页
    3.4 质粒大量提取第47-49页
    3.5 细胞转染第49页
    3.6 实时荧光定量PCR (RT-PCR)第49-51页
    3.7 细胞总蛋白提取及浓度测定第51-52页
    3.8 Western Bloting第52-54页
        3.8.1 SDS-PAGE胶制备第52-53页
        3.8.2 蛋白样品电泳第53页
        3.8.3 转膜与封闭第53-54页
        3.8.4 孵育一抗第54页
        3.8.5 孵育二抗第54页
        3.8.6 荧光显色第54页
    3.9 酶联免疫吸附实验(Elisa)第54-55页
    3.10 FITC-Dextran吞噬能力检测第55-56页
    3.11 细胞迁移检测第56页
    3.12 细胞周期检测第56-58页
4 结果与分析第58-74页
    4.1 小鼠ANGPT7全长CDS克隆第58页
    4.2 构建Angptl7在RAW264.7 细胞中的瞬时表达模型第58-59页
    4.3 Angptl7促进RAW264.7 细胞炎症相关基因的表达第59-61页
    4.4 Angptl7促进RAW264.7 细胞分泌炎症因子第61页
    4.5 Angptl7抗体封闭降低RAW264.7 细胞炎症相关基因表达第61-62页
    4.6 Angptl7促进RAW264.7 细胞吞噬能力第62-63页
    4.7 Angptl7提高RAW264.7 细胞迁移能力第63-64页
    4.8 Angptl7拮抗TGF-β1 与DEX在RAW264.7 细胞中的抗炎能力第64-65页
    4.9 Angptl7对TGF-β1 与DEX信号通路基因表达的影响第65-66页
    4.10 Angptl7降低RAW264.7 细胞增殖第66-67页
    4.11 流式细胞术分析Angptl7对RAW264.7 细胞增殖的影响第67-68页
    4.12 Angptl7抑制RAW264.7 细胞中细胞周期蛋白的表达第68页
    4.13 Angptl7促进p65与p38蛋白表达第68-69页
    4.14 Angptl7促进p65与p38蛋白磷酸化第69-70页
    4.15 P38 MAPK信号通路参与了Angptl7在RAW264.7 细胞中的促炎作用第70-72页
    4.16 TNFα 注射小鼠眼中Angptls基因家族的表达差异第72-73页
    4.17 TNFα 重组蛋白腹腔注射小鼠对眼中炎症相关基因表达的影响第73-74页
5 讨论第74-77页
结论、创新点与不足第77-78页
    1 结论第77页
    2 创新点第77页
    3 不足第77-78页
参考文献第78-98页
研究生期间发表文章第98-99页
致谢第99-100页

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