摘要 | 第8-9页 |
Abstract | 第9页 |
缩略语 | 第10-14页 |
1 前言 | 第14-37页 |
1.1 炎症 | 第14-15页 |
1.1.1 炎症引起的氧化应激 | 第14-15页 |
1.2 巨噬细胞 | 第15-22页 |
1.2.1 巨噬细胞与人类健康 | 第17-19页 |
1.2.2 巨噬细胞中的炎症通路 | 第19-22页 |
1.3 Angptls蛋白家族 | 第22-29页 |
1.3.1 Angptls与血管生成 | 第22-24页 |
1.3.2 Angptls与甘油三酯代谢 | 第24-25页 |
1.3.3 Angptls与胰岛素抵抗 | 第25-27页 |
1.3.4 Angptls与癌症 | 第27-28页 |
1.3.5 Angptls与炎症 | 第28-29页 |
1.4 Angptl7 | 第29-36页 |
1.4.1 Angptl7与角膜形态 | 第31-32页 |
1.4.2 Angptl7与血管生成 | 第32-33页 |
1.4.3 Angptl7与青光眼 | 第33-35页 |
1.4.4 Angptl7与癌症 | 第35-36页 |
1.5 研究目的与意义 | 第36-37页 |
2 实验材料与试剂 | 第37-41页 |
2.1 实验材料 | 第37页 |
2.1.1 动物材料 | 第37页 |
2.1.2 细胞材料 | 第37页 |
2.1.3 载体和质粒 | 第37页 |
2.1.4 菌株 | 第37页 |
2.2 主要仪器、试剂及溶液配制 | 第37-41页 |
2.2.1 主要仪器 | 第37-39页 |
2.2.2 主要试剂配制 | 第39页 |
2.2.3 主要试剂及试剂盒 | 第39-41页 |
3 实验方法 | 第41-58页 |
3.1 动物实验 | 第41页 |
3.2 总RNA提取、纯化、鉴定和反转录 | 第41-44页 |
3.2.1 总RNA提取 | 第41-42页 |
3.2.2 总RNA纯化 | 第42-43页 |
3.2.3 总RNA鉴定 | 第43页 |
3.2.4 总RNA反转录 | 第43-44页 |
3.3 基因片段扩增、纯化、酶切、表达载体构建和测序 | 第44-47页 |
3.3.1 小鼠Angptl7基因片段扩增 | 第44-45页 |
3.3.2 小鼠Angptl7基因片段扩增产物检测、纯化与酶切 | 第45页 |
3.3.3 小鼠Angptl7基因片段载体构建 | 第45-47页 |
3.4 质粒大量提取 | 第47-49页 |
3.5 细胞转染 | 第49页 |
3.6 实时荧光定量PCR (RT-PCR) | 第49-51页 |
3.7 细胞总蛋白提取及浓度测定 | 第51-52页 |
3.8 Western Bloting | 第52-54页 |
3.8.1 SDS-PAGE胶制备 | 第52-53页 |
3.8.2 蛋白样品电泳 | 第53页 |
3.8.3 转膜与封闭 | 第53-54页 |
3.8.4 孵育一抗 | 第54页 |
3.8.5 孵育二抗 | 第54页 |
3.8.6 荧光显色 | 第54页 |
3.9 酶联免疫吸附实验(Elisa) | 第54-55页 |
3.10 FITC-Dextran吞噬能力检测 | 第55-56页 |
3.11 细胞迁移检测 | 第56页 |
3.12 细胞周期检测 | 第56-58页 |
4 结果与分析 | 第58-74页 |
4.1 小鼠ANGPT7全长CDS克隆 | 第58页 |
4.2 构建Angptl7在RAW264.7 细胞中的瞬时表达模型 | 第58-59页 |
4.3 Angptl7促进RAW264.7 细胞炎症相关基因的表达 | 第59-61页 |
4.4 Angptl7促进RAW264.7 细胞分泌炎症因子 | 第61页 |
4.5 Angptl7抗体封闭降低RAW264.7 细胞炎症相关基因表达 | 第61-62页 |
4.6 Angptl7促进RAW264.7 细胞吞噬能力 | 第62-63页 |
4.7 Angptl7提高RAW264.7 细胞迁移能力 | 第63-64页 |
4.8 Angptl7拮抗TGF-β1 与DEX在RAW264.7 细胞中的抗炎能力 | 第64-65页 |
4.9 Angptl7对TGF-β1 与DEX信号通路基因表达的影响 | 第65-66页 |
4.10 Angptl7降低RAW264.7 细胞增殖 | 第66-67页 |
4.11 流式细胞术分析Angptl7对RAW264.7 细胞增殖的影响 | 第67-68页 |
4.12 Angptl7抑制RAW264.7 细胞中细胞周期蛋白的表达 | 第68页 |
4.13 Angptl7促进p65与p38蛋白表达 | 第68-69页 |
4.14 Angptl7促进p65与p38蛋白磷酸化 | 第69-70页 |
4.15 P38 MAPK信号通路参与了Angptl7在RAW264.7 细胞中的促炎作用 | 第70-72页 |
4.16 TNFα 注射小鼠眼中Angptls基因家族的表达差异 | 第72-73页 |
4.17 TNFα 重组蛋白腹腔注射小鼠对眼中炎症相关基因表达的影响 | 第73-74页 |
5 讨论 | 第74-77页 |
结论、创新点与不足 | 第77-78页 |
1 结论 | 第77页 |
2 创新点 | 第77页 |
3 不足 | 第77-78页 |
参考文献 | 第78-98页 |
研究生期间发表文章 | 第98-99页 |
致谢 | 第99-100页 |