| 摘要 | 第6-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-33页 |
| 1.1 羊奶脂肪酸组成及其营养价值 | 第17页 |
| 1.2 乳腺发育及泌乳生理过程 | 第17-25页 |
| 1.2.1 乳腺发育过程及其调控 | 第17-18页 |
| 1.2.2 脂肪酸从头合成 | 第18-21页 |
| 1.2.3 外源脂肪酸摄取、活化及转运 | 第21-22页 |
| 1.2.4 脂肪酸的延伸及去饱和 | 第22-24页 |
| 1.2.5 甘油三酯的合成 | 第24-25页 |
| 1.2.6 脂滴形成及分泌 | 第25页 |
| 1.3 SREBP-1 基因研究进展 | 第25-28页 |
| 1.4 脂质代谢的调控因子 | 第28-31页 |
| 1.4.1 SCAP | 第28-29页 |
| 1.4.2 INSIG | 第29页 |
| 1.4.3 LXR | 第29-30页 |
| 1.4.4 PPAR | 第30-31页 |
| 1.5 反刍动物脂代谢的调节 | 第31-32页 |
| 1.5.1 多不饱和脂肪酸对脂代谢基因的抑制作用 | 第31页 |
| 1.5.2 脂肪酸代谢调控网络 | 第31-32页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第32-33页 |
| 第二章 山羊SREBP-1 基因的超表达研究 | 第33-42页 |
| 2.1 材料与方法 | 第33-36页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第33-34页 |
| 2.1.2 主要仪器及设备 | 第34页 |
| 2.1.3 实验动物及样品采集 | 第34页 |
| 2.1.4 RNA提取及实时荧光定量PCR | 第34页 |
| 2.1.5 Ad-nSREBP1重组腺病毒的包装及扩增 | 第34-35页 |
| 2.1.6 细胞培养及处理 | 第35页 |
| 2.1.7 蛋白提取及Western blot | 第35页 |
| 2.1.8 细胞内甘油三酯含量检测 | 第35页 |
| 2.1.9 细胞内脂肪酸成分的测定 | 第35-36页 |
| 2.1.10 数据统计及分析 | 第36页 |
| 2.2 结果 | 第36-40页 |
| 2.2.1 SREBP-1 基因的组织表达分析 | 第36-37页 |
| 2.2.2 Ad-nSREBP1重组超表达腺病毒的包装及扩增 | 第37页 |
| 2.2.3 SREBP-1 超表达效果检测 | 第37-38页 |
| 2.2.4 SREBP1基因超表达对脂质合成相关基因的影响 | 第38-39页 |
| 2.2.5 SREBP1基因超表达对甘油三酯合成的影响 | 第39页 |
| 2.2.6 SREBP1基因超表达对细胞内脂肪酸成分的影响 | 第39-40页 |
| 2.3 讨论 | 第40-41页 |
| 2.4 本章小结 | 第41-42页 |
| 第三章 山羊SREBP-1 基因的RNA干扰研究 | 第42-50页 |
| 3.1 材料与方法 | 第43-44页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第43页 |
| 3.1.2 主要仪器及设备 | 第43页 |
| 3.1.3 siRNA稀释及转染 | 第43页 |
| 3.1.4 RNA提取及RT-qPCR | 第43页 |
| 3.1.5 蛋白的提取及Western blot | 第43页 |
| 3.1.6 油红O染色 | 第43-44页 |
| 3.1.7 细胞内甘油三酯检测 | 第44页 |
| 3.1.8 细胞内胆固醇检测 | 第44页 |
| 3.1.9 数据处理与分析 | 第44页 |
| 3.2 结果 | 第44-47页 |
| 3.2.1 siRNA转染效率检测 | 第44-45页 |
| 3.2.2 siSREBP1干扰效率检测 | 第45页 |
| 3.2.3 SREBP1基因的干扰对脂代谢相关基因的影响 | 第45-46页 |
| 3.2.4 SREBP1的干扰对脂滴积累及甘油三酯含量的影响 | 第46-47页 |
| 3.2.5 SREBP1的干扰对胆固醇含量的影响 | 第47页 |
| 3.3 讨论 | 第47-49页 |
| 3.4 本章小结 | 第49-50页 |
| 第四章 LXRΑ-SREBP1通路激活对山羊乳腺脂肪酸代谢的影响 | 第50-60页 |
| 4.1 材料与方法 | 第50-52页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第50页 |
| 4.1.2 主要仪器设备 | 第50-51页 |
| 4.1.3 细胞培养、RNA提取及RT-qPCR | 第51页 |
| 4.1.4 Western blot | 第51页 |
| 4.1.5 免疫荧光 | 第51页 |
| 4.1.6 油红O染色 | 第51页 |
| 4.1.7 细胞内甘油三酯含量的测定 | 第51页 |
| 4.1.8 细胞内脂肪酸成分的测定 | 第51页 |
| 4.1.9 数据处理与分析 | 第51-52页 |
| 4.2 结果 | 第52-56页 |
| 4.2.1 T0901317对SREBP-1 基因的激活作用 | 第52-53页 |
| 4.2.2 T0901317促进细胞核内成熟形式SREBP-1 蛋白的积累 | 第53页 |
| 4.2.3 LXRα-SREBP1通路的激活促进脂肪酸代谢基因的表达 | 第53-54页 |
| 4.2.4 LXRα-SREBP1通路的激活对甘油三酯含量及脂滴积累的影响 | 第54-55页 |
| 4.2.5 LXRα-SREBP1通路的激活对细胞内脂肪酸成分的影响 | 第55-56页 |
| 4.3 讨论 | 第56-58页 |
| 4.3.1 LXRα调控SREBP1基因的表达 | 第56-57页 |
| 4.3.2 LXRα直接及间接的调控山羊原代乳腺上皮细胞中乳脂及甘油三酯合成 | 第57-58页 |
| 4.3.3 LXRα与其它调节因子之间的转录调控网络 | 第58页 |
| 4.3.4 LXRα的激活促进山羊乳腺上皮细胞中单不饱和脂肪酸的生成 | 第58页 |
| 4.4 本章小结 | 第58-60页 |
| 第五章 山羊SREBP-1c基因的转录调控研究 | 第60-71页 |
| 5.1 材料与方法 | 第60-63页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第60页 |
| 5.1.2 主要仪器设备 | 第60-61页 |
| 5.1.3 山羊SREBP-1c基因启动子的克隆及生物信息学分析 | 第61-62页 |
| 5.1.4 SREBP-1c基因启动子结合位点的缺失突变及载体构建 | 第62页 |
| 5.1.5 SREBP-1c基因启动子结合位点的定点突变及载体构建 | 第62页 |
| 5.1.6 细胞培养及DNA 转染 | 第62页 |
| 5.1.7 靶向SREBP1的siRNA转染 | 第62页 |
| 5.1.8 荧光素酶活性检测 | 第62-63页 |
| 5.1.9 数据统计及分析 | 第63页 |
| 5.2 结果 | 第63-68页 |
| 5.2.1 山羊SREBP-1c启动子克隆及生物信息学分析 | 第63页 |
| 5.2.2 山羊SREBP-1c启动子活性检测 | 第63-65页 |
| 5.2.3 山羊SREBP-1c基因启动子核心区域的鉴定 | 第65-66页 |
| 5.2.4 SRE是维持SREBP-1c基因基础转录的必需元件 | 第66-67页 |
| 5.2.5 T0901317通过两个LXRE位点激活SREBP-1c的转录 | 第67-68页 |
| 5.3 讨论 | 第68-70页 |
| 5.4 本章小结 | 第70-71页 |
| 第六章 山羊ACSS2基因的转录调控研究 | 第71-82页 |
| 6.1 材料与方法 | 第72-75页 |
| 6.1.1 实验材料 | 第72页 |
| 6.1.2 主要仪器设备 | 第72页 |
| 6.1.3 山羊ACSS2基因启动子克隆及生物信息学分析 | 第72-73页 |
| 6.1.4 ACSS2基因启动子结合位点的缺失突变及载体构建 | 第73页 |
| 6.1.5 ACSS2基因启动子结合位点的定点突变及载体构建 | 第73页 |
| 6.1.6 细胞培养及DNA转染 | 第73页 |
| 6.1.7 靶向SREBP1的siRNA转染 | 第73页 |
| 6.1.8 荧光素酶活性检测 | 第73页 |
| 6.1.9 染色质免疫共沉淀（ChIP） | 第73-75页 |
| 6.1.10 数据统计及分析 | 第75页 |
| 6.2 结果 | 第75-80页 |
| 6.2.1 山羊ACSS2启动子克隆及生物信息学分析 | 第75-76页 |
| 6.2.2 山羊ACSS2启动子 5'侧翼序列缺失突变载体构建 | 第76-77页 |
| 6.2.3 山羊ACSS2启动子活性检测 | 第77页 |
| 6.2.4 山羊ACSS2启动子核心区域的确定 | 第77-78页 |
| 6.2.5 SRE位点突变及缺失对ACSS2基因启动子活性的影响 | 第78-79页 |
| 6.2.6 染色质免疫共沉淀检测SREBP-1 蛋白与ACSS2启动子上SRE位点的相互作用 | 第79-80页 |
| 6.3 讨论 | 第80-81页 |
| 6.4 本章小结 | 第81-82页 |
| 第七章 ACSS2及ACLY共同干扰对脂肪酸代谢的影响 | 第82-89页 |
| 7.1 材料与方法 | 第83-84页 |
| 7.1.1 试验材料 | 第83页 |
| 7.1.2 主要仪器 | 第83页 |
| 7.1.3 实验动物及样品采集 | 第83页 |
| 7.1.4 RNA 提取及 RT-qPCR | 第83页 |
| 7.1.5 山羊原代乳腺上皮细胞培养 | 第83页 |
| 7.1.6 siRNA稀释及转染 | 第83页 |
| 7.1.7 油红O染色 | 第83页 |
| 7.1.8 细胞内甘油三酯含量的测定 | 第83-84页 |
| 7.1.9 数据统计及分析 | 第84页 |
| 7.2 结果 | 第84-87页 |
| 7.2.1 ACSS2基因在山羊不同组织及不同泌乳时期的表达 | 第84页 |
| 7.2.2 ACSS2及ACLY共同干扰后对脂肪酸代谢基因的影响 | 第84-86页 |
| 7.2.3 ACSS2及ACLY共同干扰对脂滴积累及甘油三酯含量的影响 | 第86-87页 |
| 7.3 讨论 | 第87-88页 |
| 7.4 本章小结 | 第88-89页 |
| 结论 | 第89-90页 |
| 创新点 | 第90-91页 |
| 存在问题及展望 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-106页 |
| 附录 | 第106-110页 |
| 致谢 | 第110-111页 |
| 作者简介 | 第111页 |
