| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 符号与缩略语 | 第13-15页 |
| 第一篇 文献综述 | 第15-31页 |
| 第一章 肠出血性大肠杆菌的研究进展 | 第15-25页 |
| 1 肠出血性大肠杆菌的历史 | 第15-16页 |
| 2 肠出血性大肠杆菌的病原特性 | 第16页 |
| 2.1 分类 | 第16页 |
| 2.2 形态特征及抵抗力 | 第16页 |
| 2.3 耐药性 | 第16页 |
| 3 临床表现 | 第16页 |
| 4 肠出血性大肠杆菌的流行病学 | 第16-17页 |
| 5 肠出血性大肠杆菌的毒力因子及致病机制 | 第17-19页 |
| 5.1 志贺毒素 | 第17页 |
| 5.2 LEE毒力岛 | 第17-18页 |
| 5.3 pO157质粒 | 第18-19页 |
| 6 肠出血性大肠杆菌的检测方法 | 第19-21页 |
| 6.1 常规分离鉴定法 | 第19页 |
| 6.2 免疫学检测方法 | 第19-20页 |
| 6.3 分子生物学检测方法 | 第20-21页 |
| 7 本研究的目的与意义 | 第21-22页 |
| 参考文献 | 第22-25页 |
| 第二章 单增李斯特菌的研究进展 | 第25-31页 |
| 1 单增李斯特菌的历史概况 | 第25页 |
| 2 单增李斯特菌病原特性 | 第25-26页 |
| 2.1 分类和形态特性 | 第25页 |
| 2.2 培养特性和抵抗力 | 第25-26页 |
| 2.3 耐药性 | 第26页 |
| 3 临床表现 | 第26页 |
| 4 单增李斯特菌的流行病学 | 第26页 |
| 5 单增李斯特菌的主要致病因子 | 第26-27页 |
| 6 单增李斯特菌的检测方法 | 第27-28页 |
| 6.1 常规分离鉴定法 | 第27页 |
| 6.2 免疫学检测方法 | 第27页 |
| 6.3 分子生物学检测方法 | 第27-28页 |
| 7 本研究的目的与意义 | 第28-29页 |
| 参考文献 | 第29-31页 |
| 第二篇 试验部分 | 第31-83页 |
| 第三章 大肠杆菌O157:H7多重荧光定量PCR检测方法的建立 | 第31-59页 |
| 1 试验材料 | 第32-34页 |
| 1.1 试验试剂 | 第32页 |
| 1.2 试验设备 | 第32-33页 |
| 1.3 试验菌种 | 第33页 |
| 1.4 主要试验试剂的制备 | 第33-34页 |
| 2 技术路线 | 第34-38页 |
| 2.1 试验引物及探针的设计与合成 | 第35-36页 |
| 2.2 细菌基因组DNA的提取 | 第36页 |
| 2.3 重组质粒标准品的制备 | 第36-38页 |
| 3 多重荧光定量PCR检测方法的建立 | 第38-39页 |
| 3.1 反应体系和反应条件的优化 | 第38页 |
| 3.2 标准曲线及相应扩增曲线的建立 | 第38-39页 |
| 3.3 敏感性试验 | 第39页 |
| 3.4 重复性试验 | 第39页 |
| 3.5 特异性试验 | 第39页 |
| 4 结果 | 第39-57页 |
| 4.1 目的片段的获得及PCR扩增确认 | 第39-40页 |
| 4.2 重组阳性质粒浓度的测定与计算 | 第40-41页 |
| 4.3 单项实时荧光定量PCR检测方法的建立 | 第41-45页 |
| 4.4 双重实时荧光定量PCR检测方法的建立 | 第45-47页 |
| 4.5 三重实时荧光定量PCR检测方法的建立 | 第47-49页 |
| 4.6 敏感性试验 | 第49-51页 |
| 4.7 双重荧光定量PCR检测方法的重复性 | 第51-53页 |
| 4.8 三重荧光定量PCR检测方法的重复性 | 第53-55页 |
| 4.9 特异性试验 | 第55-57页 |
| 5 讨论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-59页 |
| 第四章 单增李斯特菌单项荧光定量PCR检测方法的建立 | 第59-71页 |
| 1 试验材料 | 第60-61页 |
| 1.1 试验试剂 | 第60页 |
| 1.2 试验设备 | 第60页 |
| 1.3 试验菌种 | 第60页 |
| 1.4 主要试验试剂的制备 | 第60-61页 |
| 1.5 试验引物及探针 | 第61页 |
| 2 试验前期准备 | 第61-62页 |
| 2.1 细菌基因组DNA的提取 | 第61页 |
| 2.2 阳性质粒标准品的制备 | 第61-62页 |
| 3 单项荧光定量PCR检测方法的建立 | 第62-63页 |
| 3.1 反应体系和反应条件的优化 | 第62页 |
| 3.2 标准曲线及相应扩增曲线的建立 | 第62页 |
| 3.3 敏感性试验 | 第62-63页 |
| 3.4 重复性试验 | 第63页 |
| 3.5 特异性试验 | 第63页 |
| 4 结果 | 第63-67页 |
| 4.1 目的片段的获得及PCR扩增确认 | 第63页 |
| 4.2 阳性质粒浓度计算 | 第63-64页 |
| 4.3 LM单项实时荧光定量PCR检测方法的建立 | 第64-65页 |
| 4.4 LM敏感性试验 | 第65-66页 |
| 4.5 LM的重复性试验 | 第66-67页 |
| 4.6 LM的特异性试验 | 第67页 |
| 5 讨论 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-71页 |
| 第五章 大肠杆菌O157:H7和单增李斯特菌多重荧光定量PCR检测方法的建立 | 第71-79页 |
| 1 试验材料 | 第71-72页 |
| 1.1 主要试剂和仪器 | 第72页 |
| 1.2 试验模板 | 第72页 |
| 1.3 引物与探针 | 第72页 |
| 2 方法 | 第72-73页 |
| 2.1 反应体系和反应条件的优化 | 第72页 |
| 2.2 标准曲线及相应扩增曲线的建立 | 第72页 |
| 2.3 重复性试验 | 第72页 |
| 2.4 特异性试验 | 第72-73页 |
| 3 结果 | 第73-77页 |
| 3.1 目的片段的获得及PCR扩增确认 | 第73页 |
| 3.2 三重实时荧光定量PCR检测方法的建立 | 第73-75页 |
| 3.3 重复性试验 | 第75-76页 |
| 3.4 特异性试验 | 第76-77页 |
| 4 讨论 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-79页 |
| 第六章 大肠杆菌O157:H7和单增李斯特菌人工污染猪肉样品的检测 | 第79-83页 |
| 1 试验材料 | 第79-80页 |
| 1.1 主要试剂和仪器 | 第79页 |
| 1.2 试验菌株和肉样 | 第79-80页 |
| 1.3 引物与探针 | 第80页 |
| 2 方法 | 第80页 |
| 2.1 细菌计数 | 第80页 |
| 2.2 人工染菌肉样中细菌的最低检出限 | 第80页 |
| 3 结果 | 第80-81页 |
| 4 讨论 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-83页 |
| 全文总结 | 第83-85页 |
| 论文创新点 | 第85-87页 |
| 致谢 | 第87页 |
