| 摘要 | 第7-8页 |
| ABSTRACT | 第8页 |
| 缩略语表 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-22页 |
| 1.1 梨腐烂病研究概况 | 第10-11页 |
| 1.1.1 梨腐烂病的危害性 | 第10页 |
| 1.1.2 梨腐烂病的病原及其症状表现 | 第10-11页 |
| 1.1.3 梨腐烂病的防治方法 | 第11页 |
| 1.2 植物病原真菌的致病机理 | 第11-12页 |
| 1.3 植物病原真菌的果胶酶研究进展 | 第12-15页 |
| 1.3.1 研究现状 | 第12页 |
| 1.3.2 果胶酶的分类 | 第12-14页 |
| 1.3.3 果胶酶活性测定 | 第14-15页 |
| 1.3.4 果胶酶与致病性之间的关系 | 第15页 |
| 1.4 植物病原真菌的聚半乳糖醛酸酶研究 | 第15-19页 |
| 1.4.1 聚半乳糖醛酸酶序列及结构 | 第15-18页 |
| 1.4.2 聚半乳糖醛酸酶的理化性质 | 第18页 |
| 1.4.3 聚半乳糖醛酸酶与致病性的关系 | 第18-19页 |
| 1.5 基于二代测序技术的转录组学研究 | 第19页 |
| 1.6 丝状真菌基因功能研究方法 | 第19-21页 |
| 1.6.1 基因敲除（gene knockout） | 第19-20页 |
| 1.6.2 基因沉默（RNAi） | 第20页 |
| 1.6.3 超表达（over-expression） | 第20-21页 |
| 1.7 选题的目的意义 | 第21-22页 |
| 第二章 梨腐烂病菌Vamepg基因的筛选与验证 | 第22-36页 |
| 2.1 材料、试剂和仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.1 材料 | 第22页 |
| 2.1.2 试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第23页 |
| 2.2 试验方法 | 第23-31页 |
| 2.2.1 扩增Vamepg基因的引物设计 | 第23-24页 |
| 2.2.2 梨树腐烂病菌基因组DNA的提取 | 第24-25页 |
| 2.2.3 Vamepg基因的克隆 | 第25-27页 |
| 2.2.4 Vamepg基因侧翼序列获取 | 第27-29页 |
| 2.2.5 Vamepg基因相对表达量的验证 | 第29-31页 |
| 2.3 结果与分析 | 第31-34页 |
| 2.3.1 Vamepg基因及蛋白序列分析 | 第31-32页 |
| 2.3.2 基因侧翼序列的获取 | 第32-33页 |
| 2.3.3 Vamepg基因相对表达量结果 | 第33-34页 |
| 2.4 讨论 | 第34-36页 |
| 第三章 梨腐烂病菌Vamepg基因敲除及转化子筛选 | 第36-54页 |
| 3.1 材料、试剂和仪器 | 第36-38页 |
| 3.1.1 材料 | 第36页 |
| 3.1.2 试剂 | 第36-38页 |
| 3.1.3 仪器 | 第38页 |
| 3.2 试验方法 | 第38-49页 |
| 3.2.1 质粒p BluescriptⅡ KS 1004 的制备 | 第38-39页 |
| 3.2.2 构建Vamepg基因敲除盒的引物设计 | 第39-41页 |
| 3.2.3 Double-joint PCR方法构建基因敲除盒 | 第41-42页 |
| 3.2.4 基因敲除盒的保存 | 第42-43页 |
| 3.2.5 PCR产物浓缩 | 第43页 |
| 3.2.6 Vamepg基因互补载体的构建 | 第43-44页 |
| 3.2.7 野生型病原菌原生质体的制备和转化 | 第44-45页 |
| 3.2.8 敲除突变体的筛选和鉴定 | 第45-48页 |
| 3.2.9 Vamepg基因功能回复验证 | 第48-49页 |
| 3.3 结果与分析 | 第49-52页 |
| 3.3.1 PCR扩增侧翼同源片段及融合片段 | 第49页 |
| 3.3.2 互补载体验证 | 第49-50页 |
| 3.3.3 转化子潮霉素稳定性检测 | 第50页 |
| 3.3.4 PCR检测 | 第50-51页 |
| 3.3.5 Southern Blot验证 | 第51-52页 |
| 3.3.6 互补突变体的验证 | 第52页 |
| 3.4 讨论 | 第52-54页 |
| 第四章 缺失Vamepg基因突变体的表型观察和致病力测定 | 第54-61页 |
| 4.1 材料、试剂和仪器 | 第54-55页 |
| 4.1.1 材料 | 第54页 |
| 4.1.2 试剂 | 第54-55页 |
| 4.1.3 仪器 | 第55页 |
| 4.2 试验方法 | 第55-56页 |
| 4.2.1 表型观察 | 第55页 |
| 4.2.2 突变体致病性鉴定 | 第55-56页 |
| 4.2.3 突变体酶活性测定 | 第56页 |
| 4.3 结果与分析 | 第56-59页 |
| 4.3.1 突变体及互补转化子表型 | 第56-57页 |
| 4.3.2 突变体致病力检测结果 | 第57-58页 |
| 4.3.3 酶活力测定 | 第58-59页 |
| 4.4 讨论 | 第59-61页 |
| 第五章 全文结论与展望 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-70页 |
| 附录 | 第70-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
