| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 第一章 前言 | 第9-14页 |
| ·我国水产养殖业的现状 | 第9页 |
| ·海豚链球菌 | 第9-11页 |
| ·病原菌 | 第9-10页 |
| ·海豚链球菌症状和病理变化 | 第10页 |
| ·分子生物学鉴定海豚链球菌 | 第10页 |
| ·海豚链球菌的疫苗 | 第10-11页 |
| ·鱼类疫苗的种类 | 第11-13页 |
| ·传统型疫苗 | 第11-12页 |
| ·灭活疫苗 | 第11页 |
| ·减毒疫苗 | 第11-12页 |
| ·新型疫苗 | 第12-13页 |
| ·亚单位疫苗 | 第12页 |
| ·合成肽疫苗 | 第12页 |
| ·DNA 疫苗 | 第12-13页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第13-14页 |
| 第二章 海豚链球菌基因Sia10 的克隆及分析 | 第14-22页 |
| ·材料和方法 | 第14-21页 |
| ·实验材料 | 第14-16页 |
| ·菌株和质粒 | 第14页 |
| ·实验试剂 | 第14页 |
| ·实验仪器 | 第14页 |
| ·实验所用软件 | 第14页 |
| ·常用培养基与溶液 | 第14-16页 |
| ·实验方法 | 第16-21页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第16-17页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第17页 |
| ·感受态细胞转化效率的测定 | 第17-18页 |
| ·转化 | 第18页 |
| ·质粒的小量提取 | 第18页 |
| ·体内诱导抗原技术 | 第18-19页 |
| ·海豚链球菌SF1 染色体步移文库的构建 | 第19-20页 |
| ·染色体步移方法获得Sia10 基因 | 第20-21页 |
| ·结论 | 第21-22页 |
| 第三章 海豚链球菌Sia10 蛋白疫苗及DNA疫苗的构建及表达 | 第22-36页 |
| ·材料和方法 | 第22-30页 |
| ·实验材料 | 第22-25页 |
| ·菌株和质粒 | 第22页 |
| ·实验试剂 | 第22页 |
| ·实验仪器 | 第22页 |
| ·实验软件 | 第22页 |
| ·大菱鲆 | 第22页 |
| ·常用的培养基及溶液 | 第22-25页 |
| ·实验方法 | 第25-30页 |
| ·重组蛋白诱导表达 | 第25-26页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第26页 |
| ·尿素蛋白变性方法回收 | 第26-27页 |
| ·无内毒素质粒大量提取 | 第27-28页 |
| ·免疫胶体金技术 | 第28-29页 |
| ·TRIzol法提取组织DNA.RNA | 第29-30页 |
| ·RNA的转录 | 第30页 |
| ·Sia10 基因在大肠杆菌中的表达 | 第30-32页 |
| ·Sia10 的基因扩增 | 第30-31页 |
| ·pETSia10 表达载体的构建 | 第31-32页 |
| ·pET258 质粒的构建 | 第31页 |
| ·载体和插入片段的连接 | 第31页 |
| ·Sia10 基因的诱导表达 | 第31-32页 |
| ·Sia10 基因在免疫鱼体中的表达 | 第32-33页 |
| ·Sia10 的基因扩增 | 第32页 |
| ·pSia10 表达载体的构建 | 第32-33页 |
| ·pCN3 质粒的构建 | 第32-33页 |
| ·载体和插入片段的连接 | 第33页 |
| ·pSia10 的表达 | 第33页 |
| ·结果和讨论 | 第33-36页 |
| ·Sia10 基因在大肠杆菌中表达及纯化结果 | 第33-34页 |
| ·Sia10 基因在免疫鱼体中的表达 | 第34-36页 |
| ·从DNA、RNA水平上检测Sia10 基因在免疫鱼体中表达 | 第34-35页 |
| ·从免疫学方面检测Sia10 基因在免疫鱼体中表达 | 第35-36页 |
| 第四章 蛋白疫苗及DNA疫苗免疫保护效应等方面的检测 | 第36-48页 |
| ·材料和方法 | 第36-41页 |
| ·实验材料 | 第36-37页 |
| ·菌株和质粒 | 第36页 |
| ·实验试剂 | 第36页 |
| ·实验仪器 | 第36页 |
| ·实验软件 | 第36页 |
| ·大菱鲆 | 第36-37页 |
| ·实验方法 | 第37-41页 |
| ·腹腔注射免疫法 | 第37页 |
| ·肌肉注射免疫法 | 第37页 |
| ·攻毒试验 | 第37-38页 |
| ·病理切片 | 第38页 |
| ·ELISA检测抗体效价 | 第38-39页 |
| ·试剂盒RNA的提取 | 第39-40页 |
| ·荧光定量PCR检验pSia10 免疫大菱鲆的免疫基因表达情况 | 第40-41页 |
| ·被动免疫 | 第41页 |
| ·pSia10 影响巨噬细胞的免疫活性 | 第41-43页 |
| ·大菱鲆巨噬细胞的提取 | 第41-42页 |
| ·化学发光法检测大菱鲆呼吸爆发 | 第42页 |
| ·氧化氮产物的检测 | 第42-43页 |
| ·AP酸性磷酸酶活性检测 | 第43页 |
| ·结果和讨论 | 第43-48页 |
| ·海豚链球菌Sia10 作为亚单位疫苗免疫保护效应 | 第43页 |
| ·pSia10 免疫引起的免疫反应 | 第43-47页 |
| ·pSia10 免疫对巨噬细胞免疫活性的影响 | 第44-45页 |
| ·血清抗体免疫的产生 | 第45-46页 |
| ·免疫相关基因的表达 | 第46-47页 |
| ·被动免疫 | 第47-48页 |
| 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-55页 |
| 硕士期间发表的文章 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
