| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 缩略词表 | 第12-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-29页 |
| 1.1 植物抗逆基因工程研究进展 | 第15-19页 |
| 1.1.1 各种抗逆机制研究进展 | 第15-17页 |
| 1.1.1.1 抗旱机制研究进展 | 第15-16页 |
| 1.1.1.2 抗盐机制究进展 | 第16页 |
| 1.1.1.3 抗低温机制研究进展 | 第16-17页 |
| 1.1.2 植物抗逆的分子反应机制 | 第17-18页 |
| 1.1.2.1 与渗透调节有关的小分子合成机制 | 第17-18页 |
| 1.1.2.2 与抗逆相关的蛋白质的合成 | 第18页 |
| 1.1.2.3 与抗逆相关的信号传导途径 | 第18页 |
| 1.1.3 植物抗逆相关基因克隆研究进展 | 第18-19页 |
| 1.2 脯氨酸的代谢及积累的意义 | 第19-22页 |
| 1.2.1 脯氨酸的代谢途径 | 第19-21页 |
| 1.2.1.1 脯氨酸合成的途径 | 第19-21页 |
| 1.2.1.2 脯氨酸降解途径 | 第21页 |
| 1.2.2 脯氨酸积累的意义 | 第21-22页 |
| 1.3 P5CS基因的研究进展 | 第22-27页 |
| 1.3.1 植物抗渗透胁迫机制 | 第22-24页 |
| 1.3.2 P5CS基因的研究进展 | 第24-26页 |
| 1.3.3 转P5CS基因的研究进展 | 第26-27页 |
| 1.4 本研究的意义及立题依据 | 第27-29页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第29-46页 |
| 2.1 实验材料 | 第29-31页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第29页 |
| 2.1.2 材料培养与处理 | 第29页 |
| 2.1.3 菌株与载体 | 第29页 |
| 2.1.4 酶及各种生化试剂 | 第29页 |
| 2.1.5 PCR引物 | 第29-31页 |
| 2.1.6 仪器 | 第31页 |
| 2.2 柠条P5CS基因的克隆 | 第31-46页 |
| 2.2.1 柠条P5CS基因中间片段的克隆 | 第31-36页 |
| 2.2.1.1 柠条叶片总RNA的提取 | 第31-32页 |
| 2.2.1.2 反转录c DNA第一链的合成 | 第32-33页 |
| 2.2.1.3 P5CS基因CDS区片段的克隆 | 第33页 |
| 2.2.1.4 目的基因片段的回收 | 第33-34页 |
| 2.2.1.5 连接反应 | 第34-35页 |
| 2.2.1.6 重组T载体转化大肠杆菌感受态细胞 | 第35页 |
| 2.2.1.7 平板筛选及菌液PCR | 第35-36页 |
| 2.2.2 RACE法克隆柠条P5CS基因 | 第36-41页 |
| 2.2.2.1 柠条P5CS基因的 3’RACE克隆 | 第36-38页 |
| 2.2.2.2 柠条P5CS基因的 5’RACE克隆 | 第38-41页 |
| 2.2.3 柠条P5CS基因全长的扩增 | 第41页 |
| 2.2.4 柠条P5CS基因的生物信息学分析 | 第41-42页 |
| 2.2.5 柠条P5CS基因的组织特异性表达检测 | 第42页 |
| 2.2.6 逆境对柠条P5CS基因的转录水平影响 | 第42-43页 |
| 2.2.7 盐胁迫下柠条叶片中各种生理指标的变化 | 第43-46页 |
| 2.2.7.1 抗氧化酶活性的测定 | 第43-44页 |
| 2.2.7.2 MDA含量的测定 | 第44页 |
| 2.2.7.3 叶绿素含量的测定 | 第44页 |
| 2.2.7.4 游离脯氨酸含量的测定 | 第44-45页 |
| 2.2.7.5 数据分析方法 | 第45-46页 |
| 第三章 结果与分析 | 第46-70页 |
| 3.1 柠条CkP5CS基因的克隆 | 第46-51页 |
| 3.1.1 CkP5CS基因中间片段的克隆 | 第46-48页 |
| 3.1.2 CkP5CS基因序列 3’RACE扩增结果 | 第48-49页 |
| 3.1.3 Ck P5CS基因序列 5’RACE扩增结果 | 第49-50页 |
| 3.1.4 Ck P5CS基因序列全长基因的克隆及测序结果 | 第50-51页 |
| 3.2 柠条CkP5CS基因的序列分析 | 第51-54页 |
| 3.2.1 Ck P5CS全长cDNA分析 | 第51-52页 |
| 3.2.2 CkP5CS与部分植物P5CS同源性及系统树分析 | 第52-54页 |
| 3.3 CkP5CS的生物信息学分析 | 第54-60页 |
| 3.3.1 P5CS预测蛋白质等电点及分子量计算 | 第54-56页 |
| 3.3.2 柠条P5CS预测蛋白质疏水性/亲水性、跨膜结构域及信号肽分析 | 第56-58页 |
| 3.3.3 柠条P5CS预测蛋白质二级结构的预测 | 第58-60页 |
| 3.3.4 P5CS蛋白质三级结构预测 | 第60页 |
| 3.4 逆境胁迫下CkP5CS基因转录水平实时荧光定量PCR结果分析 | 第60-63页 |
| 3.4.1 低温胁迫对CkP5CS基因转录水平的影响 | 第60-61页 |
| 3.4.2 盐胁迫对CkP5CS基因转录水平的影响 | 第61-62页 |
| 3.4.3 干旱胁迫对CkP5CS基因转录水平的影响 | 第62-63页 |
| 3.5 柠条CkP5CS基因组织特异性表达检测结果 | 第63页 |
| 3.6 盐胁迫下柠条中各个生理指标的变化 | 第63-70页 |
| 3.6.1 MDA含量的变化 | 第63-64页 |
| 3.6.2 脯氨酸含量的变化 | 第64-65页 |
| 3.6.3 叶绿素含量的变化 | 第65-66页 |
| 3.6.4 抗氧化酶活性的变化 | 第66-70页 |
| 3.6.4.1 CAT活性的变化 | 第66-67页 |
| 3.6.4.2 APX活的性变化 | 第67-68页 |
| 3.6.4.3 GPX活的性变化 | 第68页 |
| 3.6.4.4 SOD活性的变化 | 第68-70页 |
| 第四章 讨论 | 第70-73页 |
| 4.1 柠条P5CS的序列信息 | 第70页 |
| 4.2 柠条P5CS的生物信息学分析 | 第70页 |
| 4.3 逆境胁迫对柠条P5CS基因转录水平的影响 | 第70-71页 |
| 4.4 逆境胁迫对柠条中各个生理指标的影响 | 第71-73页 |
| 第五章 结论 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-85页 |
| 致谢 | 第85页 |
