| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7页 |
| 中英文缩写对照表 | 第14-15页 |
| 第1章 文献综述 | 第15-28页 |
| 1.1 转氨酶简介 | 第15-20页 |
| 1.1.1 转氨酶的来源及分类 | 第15-17页 |
| 1.1.2 转氨酶催化机制 | 第17-18页 |
| 1.1.3 转氨酶的应用 | 第18-20页 |
| 1.2 西他列汀 | 第20-27页 |
| 1.2.1 糖尿病简介 | 第20-21页 |
| 1.2.2 西他列汀简介 | 第21-23页 |
| 1.2.3 酶法制备西他列汀 | 第23-27页 |
| 1.3 本课题的研究思路和主要内容 | 第27-28页 |
| 第2章 新型转氨酶基因探矿及表达 | 第28-46页 |
| 2.1 引言 | 第28页 |
| 2.2 实验材料 | 第28-32页 |
| 2.2.1 菌种和质粒 | 第28-29页 |
| 2.2.2 主要实验仪器 | 第29-30页 |
| 2.2.3 常用实验试剂与药品 | 第30-32页 |
| 2.3 实验方法 | 第32-35页 |
| 2.3.1 新型转氨酶的基因挖掘 | 第32页 |
| 2.3.2 菌种的活化和保藏 | 第32页 |
| 2.3.3 基因来源菌种的诱导 | 第32-33页 |
| 2.3.4 超声破碎 | 第33页 |
| 2.3.5 SDS-PAGE电泳 | 第33-34页 |
| 2.3.6 Ni-NTA亲和柱纯化 | 第34-35页 |
| 2.4 分析方法 | 第35-39页 |
| 2.4.1 高效液相色谱法的建立 | 第35-38页 |
| 2.4.2 酶活测定方法 | 第38-39页 |
| 2.4.3 蛋白浓度测定 | 第39页 |
| 2.5 结果与讨论 | 第39-45页 |
| 2.5.1 重组转氨酶的获得 | 第39-41页 |
| 2.5.2 重组转氨酶及ATA117的异源表达 | 第41-43页 |
| 2.5.3 重组菌粗酶酶活测定 | 第43页 |
| 2.5.4 ATA117和pETDuet-1-Nec纯化 | 第43-45页 |
| 2.6 本章小结 | 第45-46页 |
| 第3章 定点突变提商重组转氨酶NEC的催化活性 | 第46-56页 |
| 3.1 引言 | 第46页 |
| 3.2 实验材料与方法 | 第46-48页 |
| 3.2.1 实验仪器 | 第46-47页 |
| 3.2.2 药品与试剂 | 第47-48页 |
| 3.3 实验方法 | 第48-49页 |
| 3.3.1 突变株的构建 | 第48页 |
| 3.3.2 质粒抽提 | 第48页 |
| 3.3.3 琼脂糖凝胶电泳 | 第48页 |
| 3.3.4 PCR扩增全质粒 | 第48-49页 |
| 3.3.5 大肠杆菌BL21(DE3)感受态的制备及转化 | 第49页 |
| 3.4 结果及分析 | 第49-55页 |
| 3.4.1 结合域空间结构分析 | 第49-50页 |
| 3.4.2 定点饱和突变 | 第50-51页 |
| 3.4.3 单点突变对催化活性的影响 | 第51-53页 |
| 3.4.4 组合突变及活性表达 | 第53-55页 |
| 3.5 本章小结 | 第55-56页 |
| 第4章 转氨酶突变体的酶学性质研究 | 第56-67页 |
| 4.1 引言 | 第56页 |
| 4.2 实验材料与方法 | 第56-57页 |
| 4.2.1 菌种与质粒 | 第56页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第56页 |
| 4.2.3 实验药品 | 第56-57页 |
| 4.3 转氨酶突变体的酶学性质研究 | 第57-59页 |
| 4.3.1 产酶条件优化 | 第57页 |
| 4.3.2 转氨酶突变体的酶学性质研究 | 第57-58页 |
| 4.3.3 催化制备西他列汀手性中间体 | 第58-59页 |
| 4.4 结果及分析 | 第59-66页 |
| 4.4.1 产酶条件优化 | 第59-62页 |
| 4.4.2 酶学性质表征 | 第62-65页 |
| 4.4.3 转氨酶催化西他列汀手性中间体 | 第65-66页 |
| 4.5 本章小结 | 第66-67页 |
| 第5章 结论与展望 | 第67-69页 |
| 5.1 结论 | 第67-68页 |
| 5.2 展望 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-72页 |
| 附录A 本研究涉及的基因序列 | 第72-76页 |
| 附录B 引物列表 | 第76-81页 |
| 作者筒介 | 第81页 |