| 致谢 | 第4-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-24页 |
| 1. 猪繁殖与呼吸综合征病毒分子特征 | 第13-17页 |
| 1.1 PRRSV形态结构 | 第13页 |
| 1.2 PRRSV基因组特征 | 第13-16页 |
| 1.3 PRRSV主要结构蛋白 | 第16页 |
| 1.4 PRRSV次要结构蛋白 | 第16-17页 |
| 1.5 PRRSV非结构蛋白 | 第17页 |
| 2. PRRSV基因组复制与亚基因组合成 | 第17-20页 |
| 2.1 PRRSV基因组复制 | 第17-19页 |
| 2.2 PRRSV亚基因组RNA的合成 | 第19-20页 |
| 3. PRRSV流行变异情况 | 第20-21页 |
| 4. PRRSV重组 | 第21-22页 |
| 5. PRRSV感染性克隆的构建和应用 | 第22-23页 |
| 5.1 PRRSV感染性克隆的构建 | 第22页 |
| 5.2 PRRSV感染性克隆的改造和应用 | 第22-23页 |
| 6. 本研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| 第二章 我国中部地区PRRSV毒株流行病学调查 | 第24-43页 |
| 1. 前言 | 第24页 |
| 2. 材料和方法 | 第24-30页 |
| 2.1 材料 | 第24-25页 |
| 2.1.1 细胞、菌种和载体 | 第24页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第24页 |
| 2.1.3 培养基和常用溶液配制 | 第24-25页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-30页 |
| 2.2.1 总RNA提取 | 第25页 |
| 2.2.2 RT-PCR扩增 | 第25-26页 |
| 2.2.3 目的片段克隆测序 | 第26-27页 |
| 2.2.4 序列比对与进化分析 | 第27-29页 |
| 2.2.5 病毒的分离与增殖 | 第29页 |
| 2.2.6 免疫荧光试验（IFA）鉴定 | 第29页 |
| 2.2.7 半数组织感染量（TCID50）测定与生长动力曲线绘制 | 第29-30页 |
| 3. 结果与分析 | 第30-40页 |
| 3.1 PRRSV流行变异分析 | 第30-35页 |
| 3.1.1 Nsp2和ORF5目的基因克隆 | 第30页 |
| 3.1.2 Nsp2和GP5基因遗传进化分析 | 第30-35页 |
| 3.2 PRRSV流行毒株分离、鉴定与分析 | 第35-40页 |
| 3.2.1 HNhx毒株分离 | 第35-36页 |
| 3.2.2 HNhx毒株生长动力曲线 | 第36-37页 |
| 3.2.3 HNhx全基因组序列扩增 | 第37-38页 |
| 3.2.4 HNhx毒株全基因组遗传进化分析 | 第38-39页 |
| 3.2.5 HNhx全基因序列重组分析 | 第39-40页 |
| 4. 讨论 | 第40-43页 |
| 第三章 PRRSV Nsp7β保守位点功能验证 | 第43-53页 |
| 1. 前言 | 第43页 |
| 2. 材料和方法 | 第43-47页 |
| 2.1 材料 | 第43-44页 |
| 2.1.1 细胞、菌种和载体 | 第43页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第43页 |
| 2.1.3 培养基和常用溶液配制 | 第43-44页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第44页 |
| 2.2 实验方法 | 第44-47页 |
| 2.2.1 总RNA提取 | 第44-45页 |
| 2.2.2 RT-PCR扩增目的片段 | 第45页 |
| 2.2.3 目的片段克隆测序 | 第45页 |
| 2.2.4 质粒构建 | 第45页 |
| 2.2.5 质粒转染与病毒拯救 | 第45页 |
| 2.2.6 免疫荧光试验（IFA）鉴定 | 第45页 |
| 2.2.7 Western Blot | 第45-47页 |
| 3. 结果与分析 | 第47-51页 |
| 3.1 PRRSV非结构蛋白Nsp7β保守位点分析 | 第47页 |
| 3.2 PRRSV反向遗传操作平台构建 | 第47-51页 |
| 3.2.1 HN07-1 全基因组克隆测序 | 第47-49页 |
| 3.2.2 反向遗传操作平台构建 | 第49-50页 |
| 3.2.3 rHN07-1 和rHN071EGFP毒株拯救与验证 | 第50-51页 |
| 3.3 PRRSV非结构蛋白Nsp7β保守位点功能鉴定 | 第51页 |
| 4.讨论 | 第51-53页 |
| 全文总结 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-62页 |
| 基金项目 | 第62页 |
| 发表论文 | 第62页 |
