| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 文中的缩写词 | 第9-14页 |
| 1 前言 | 第14-26页 |
| 1.1 杆状病毒 | 第14-17页 |
| 1.1.1 杆状病毒的分类 | 第14-15页 |
| 1.1.2 杆状病毒的结构 | 第15-16页 |
| 1.1.3 杆状病毒的生活周期 | 第16-17页 |
| 1.1.4 杆状病毒的基因表达 | 第17页 |
| 1.2 杆状病毒的囊膜蛋白 | 第17-20页 |
| 1.2.1 BV和ODV共有的囊膜蛋白 | 第18页 |
| 1.2.2 ODV主要的囊膜蛋白 | 第18-20页 |
| 1.2.3 BV主要的囊膜蛋白 | 第20页 |
| 1.3 BV/ODV-E26 | 第20-21页 |
| 1.4 杆状病毒与宿主细胞的相互作用 | 第21-22页 |
| 1.4.1 宿主对病毒的作用及影响 | 第21页 |
| 1.4.2 病毒对宿主的作用及影响 | 第21-22页 |
| 1.5 蛋白质相互作用的研究方法 | 第22-24页 |
| 1.5.1 酵母双杂交技术 | 第22-23页 |
| 1.5.2 GST-Pull down技术 | 第23-24页 |
| 1.5.3 双分子荧光互补技术 | 第24页 |
| 1.5.4 免疫共沉淀技术 | 第24页 |
| 1.6 研究目的及意义 | 第24-26页 |
| 2 实验材料和设备 | 第26-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-37页 |
| 2.1.1 昆虫细胞系及病毒株 | 第26页 |
| 2.1.2 酵母菌菌株及大肠杆菌 | 第26页 |
| 2.1.3 培养基 | 第26-28页 |
| 2.1.4 抗生素 | 第28-29页 |
| 2.1.5 常用溶液 | 第29-31页 |
| 2.1.6 药品及相关试剂 | 第31-32页 |
| 2.1.7 仪器设备 | 第32页 |
| 2.1.8 载体质粒 | 第32-33页 |
| 2.1.9 本实验用到的引物 | 第33-35页 |
| 2.1.10 实验中构建的重组质粒和重组病毒 | 第35-37页 |
| 3 实验方法 | 第37-55页 |
| 3.1 重组质粒的构建 | 第37-40页 |
| 3.1.1 设计引物 | 第37页 |
| 3.1.2 目的片段扩增 | 第37-38页 |
| 3.1.3 DNA纯化胶回收 | 第38页 |
| 3.1.4 双酶切回收的目的片段及载体质粒 | 第38页 |
| 3.1.5 目的片段与载体的酶连反应 | 第38-39页 |
| 3.1.6 大肠杆菌DH5a感受态细胞的制备 | 第39页 |
| 3.1.7 质粒及酶连产物转化于大肠杆菌DH5a感受态细胞 | 第39-40页 |
| 3.1.8 碱裂解法提取质粒 | 第40页 |
| 3.2 酵母双杂交 | 第40-46页 |
| 3.2.1 AH109和Y187酵母菌株感受态细胞 | 第40-41页 |
| 3.2.2 将pGBKT7-e26诱饵质粒转入Y187和AH109感受态细胞 | 第41页 |
| 3.2.3 自激活检测 | 第41-42页 |
| 3.2.4 检测诱饵蛋白对酵母菌株的毒性 | 第42页 |
| 3.2.5 与文库杂交 | 第42-43页 |
| 3.2.6 划线筛选阳性克隆 | 第43页 |
| 3.2.7 X-Gal显色筛选阳性克隆 | 第43-44页 |
| 3.2.8 酵母菌落PCR | 第44页 |
| 3.2.9 提取酵母质粒并PCR鉴定 | 第44-45页 |
| 3.2.10 转化酵母质粒到DH5a大肠杆菌感受态细胞中 | 第45页 |
| 3.2.11 小量回交验证 | 第45页 |
| 3.2.12 回交显色 | 第45-46页 |
| 3.2.13 测序以及序列比对 | 第46页 |
| 3.3 重组Bacmid的构建 | 第46-47页 |
| 3.3.1 制备野生型Bacmid的DH10B菌株的化学感受态细胞 | 第46页 |
| 3.3.2 转座 | 第46页 |
| 3.3.3 重组bacmid的提取 | 第46页 |
| 3.3.4 重组bacmid的PCR鉴定 | 第46-47页 |
| 3.4 Sf9细胞的转染 | 第47页 |
| 3.5 Sf9细胞的感染 | 第47-48页 |
| 3.6 GST-pull down | 第48-49页 |
| 3.6.1 GST-pull down实验重组质粒构建 | 第48页 |
| 3.6.2 GST-pull down实验步骤 | 第48-49页 |
| 3.7 SDS-PAGE | 第49-50页 |
| 3.8 Western blot | 第50-51页 |
| 3.9 双分子荧光互补实验 | 第51-52页 |
| 3.9.1 双分子荧光实验重组质粒构建 | 第51-52页 |
| 3.9.2 双分子荧光实验步骤 | 第52页 |
| 3.10 e26原核表达和纯化 | 第52-54页 |
| 3.10.1 E26-His蛋白的原核表达 | 第52-53页 |
| 3.10.2 E26-His融合蛋白的纯化 | 第53-54页 |
| 3.11 抗血清的制备 | 第54-55页 |
| 4 实验结果 | 第55-70页 |
| 4.1 AcMNPV E26序列分析 | 第55-56页 |
| 4.2 与AcMNPV E26相互作用的Sf9的细胞蛋白基因的筛选 | 第56-61页 |
| 4.2.1 诱饵质粒pGBKT7-e26的构建 | 第56页 |
| 4.2.2 GAL4 BD-E26融合蛋白的自激活和细胞毒性检测 | 第56-57页 |
| 4.2.3 从宿主Sf9细胞cDNA文库中筛选和鉴定与E26相互作用的蛋白因子 | 第57-61页 |
| 4.3 AcMNPV E26与P21的GST-Pull down分析 | 第61-62页 |
| 4.4 AcMNPV E26与P21的双分子荧光互补分析 | 第62-64页 |
| 4.5 AcMNPV E26与P21之间相互作用位点的识别 | 第64-66页 |
| 4.5.1 e26截短型突变体的构建 | 第64-66页 |
| 4.5.2 E26与P21之间相互作用位点的识别 | 第66页 |
| 4.6 AcMNPV E26的原核表达和多克隆抗体的制备 | 第66-70页 |
| 4.6.1 AcMNPV E26的原核表达与纯化 | 第66-68页 |
| 4.6.2 AcMNPV E26抗体的制备和抗体特异性检测 | 第68-70页 |
| 5 讨论 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-79页 |
| 在校期间发表论文 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
