| 中文摘要 | 第6-10页 |
| 英文摘要 | 第10-13页 |
| 符号说明 | 第14-16页 |
| 前言 | 第16-27页 |
| 参考文献 | 第21-27页 |
| 第一部分 CSN6、Myc蛋白在人结直肠癌组织中的表达及临床意义 | 第27-40页 |
| 1 材料 | 第27-29页 |
| 1.1 组织及病理切片来源 | 第27页 |
| 1.2 临床病理资料 | 第27页 |
| 1.3 实验试剂 | 第27-28页 |
| 1.4 主要仪器 | 第28页 |
| 1.5 主要试剂配制 | 第28-29页 |
| 2 方法 | 第29-33页 |
| 2.1 组织免疫组化染色 | 第29-30页 |
| 2.2 实时荧光定量PCR (RT-qPCR) | 第30-33页 |
| 3 结果 | 第33-36页 |
| 3.1 资料分析型 | 第33页 |
| 3.2 CSN6、Myc蛋白在结直肠癌组织中的表达 | 第33-35页 |
| 3.3 qRT- PCR检测CSN6结果 | 第35-36页 |
| 4 讨论 | 第36-38页 |
| 参考文献 | 第38-40页 |
| 第二部分 南蛇藤总萜诱导人结直肠癌HT-29细胞凋亡与自噬的实验研究 | 第40-68页 |
| 1 材料 | 第41-45页 |
| 1.1 药品 | 第41页 |
| 1.2 细胞株 | 第41页 |
| 1.3 实验试剂 | 第41-42页 |
| 1.4 主要仪器 | 第42-43页 |
| 1.5 主要试剂配制 | 第43-45页 |
| 1.6 引物设计 | 第45页 |
| 2 方法 | 第45-52页 |
| 2.1 药物准备 | 第45-46页 |
| 2.2 细胞培养 | 第46页 |
| 2.3 细胞活力实验(MTT法) | 第46页 |
| 2.4 流式细胞仪检测检测COE对HT-29细胞凋亡的影响 | 第46页 |
| 2.5 流式细胞仪检测COE对HT-29细胞周期的影响 | 第46-47页 |
| 2.6 流式细胞仪检测线粒体膜电位的改变 | 第47页 |
| 2.7 透射电镜样品制备与观察细胞凋亡小体与自噬体的形态 | 第47-48页 |
| 2.8 Western blot实验 | 第48-50页 |
| 2.9 RT-PCR检测BeclinlmRNA、LC3mRNA | 第50-52页 |
| 2.10 统计学处理 | 第52页 |
| 3 结果 | 第52-59页 |
| 3.1 COE抑制HT-29增殖 | 第52页 |
| 3.2 透射电镜观察HT-29细胞凋亡小体 | 第52-53页 |
| 3.3 流式细胞仪检测检测COE对HT-29细胞凋亡的影响 | 第53页 |
| 3.4 流式细胞仪检测检测COE对HT-29细胞周期的影响 | 第53-54页 |
| 3.5 流式细胞仪检测HT-29细胞线粒体膜电位 | 第54-55页 |
| 3.6 Western blotting分析COE对Bcl-2家族蛋白及caspases酶的表达影响 | 第55-56页 |
| 3.7 COE诱导结直肠癌HT-29细胞自噬的产生 | 第56-58页 |
| 3.8 自噬激动剂Rapamycin和抑制剂3-MA调节自噬水平对凋亡的影响 | 第58-59页 |
| 4 讨论 | 第59-64页 |
| 参考文献 | 第64-68页 |
| 第三部分 COE诱导结直肠癌HT-29细胞凋亡及自噬的分子机制 | 第68-89页 |
| 1 材料 | 第68-70页 |
| 1.1 药品 | 第68页 |
| 1.2 细胞株细胞、质粒和菌株 | 第68页 |
| 1.3 实验试剂 | 第68-69页 |
| 1.4 CSN6基因的编码序列克隆引物设定 | 第69页 |
| 1.5 主要仪器 | 第69-70页 |
| 1.6 主要试剂配制 | 第70页 |
| 2 方法 | 第70-75页 |
| 2.1 药物准备 | 第70页 |
| 2.2 细胞培养 | 第70页 |
| 2.3 Western blot实验 | 第70页 |
| 2.4 RT-PCR检测HT-29细胞中的CSN6mRNA | 第70-71页 |
| 2.5 重组逆转录病毒质粒MIGR1-CSN6、MIGR1-Akt的构建及鉴定 | 第71-74页 |
| 2.6 脂质体介导法转染细胞 | 第74-75页 |
| 2.7 流式细胞术检测转染效率 | 第75页 |
| 2.8 筛选建立稳定过表达MIGRI-CSN6、MIGR1-Akt基因的结直肠癌细胞株 | 第75页 |
| 2.9 统计学处理 | 第75页 |
| 3 结果 | 第75-83页 |
| 3.1 COE对CSN6及其下游基因表达的影响 | 第75-76页 |
| 3.2 重组逆转录病毒质粒MIGR1-CSN6、MIGRI-Akt的构建及鉴定 | 第76-79页 |
| 3.3 筛选稳定过表达CSN6、Akt基因的结直肠癌细胞株 | 第79-81页 |
| 3.4 CSN6过表达对COE抑制HT-29细胞增殖的影响 | 第81-82页 |
| 3.5 Akt激酶过表达对CSN6-Myc信号轴的影响 | 第82页 |
| 3.6 COE对PI3K/Akt信号通路活化的影响 | 第82-83页 |
| 4 讨论 | 第83-86页 |
| 参考文献 | 第86-89页 |
| 文献综述一 | 第89-101页 |
| 参考文献 | 第95-101页 |
| 文献综述二 | 第101-119页 |
| 参考文献 | 第110-119页 |
| 致谢 | 第119-120页 |
| 攻读博士期间发表的学术论文目录 | 第120-121页 |
