| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-19页 |
| 1.1 大豆根瘤固氮进展 | 第11页 |
| 1.2 根瘤固氮 | 第11-12页 |
| 1.3 结瘤因子的感知 | 第12-14页 |
| 1.3.1 结瘤因子的行为 | 第12页 |
| 1.3.2 感知外界信号的机制 | 第12-13页 |
| 1.3.3 G蛋白 | 第13页 |
| 1.3.4 受体类激酶 | 第13-14页 |
| 1.4 钙离子介导的信号转导途径 | 第14-15页 |
| 1.5 根瘤固氮的代谢途径 | 第15-17页 |
| 1.6 酵母双杂交系统及应用 | 第17-18页 |
| 1.6.1 酵母双杂交原理 | 第17页 |
| 1.6.2 酵母双杂交的应用 | 第17-18页 |
| 1.7 本研究的目的与意义 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-35页 |
| 2.1 材料 | 第19-21页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第19页 |
| 2.1.2 载体与菌株 | 第19页 |
| 2.1.3 分子生物学试剂 | 第19-20页 |
| 2.1.4 培养基 | 第20-21页 |
| 2.2 方法 | 第21-30页 |
| 2.2.1 植物材料总RNA提取 | 第21-22页 |
| 2.2.2 cDNA第一链的合成 | 第22页 |
| 2.2.3 大肠杆菌感受态细胞的制备(CaCl_2法)及转化 | 第22-23页 |
| 2.2.4 农杆菌电转化感受态细胞的制备及转化 | 第23-24页 |
| 2.2.5 目的基因序列查找及引物设计 | 第24页 |
| 2.2.6 目的基因的克隆 | 第24-25页 |
| 2.2.7 载体的构建 | 第25-28页 |
| 2.2.8 大豆发根转化 | 第28-29页 |
| 2.2.9 Quantitative Real-time PCR | 第29-30页 |
| 2.3 PGBKT7/BAIT小规模转化酵母菌AH109 | 第30页 |
| 2.4 文库质粒大规模转化已携带钓饵质粒的酵母 | 第30-31页 |
| 2.5 酵母质粒提取 | 第31-33页 |
| 2.6 双分子荧光蛋白载体构建 | 第33页 |
| 2.7 烟草注射 | 第33-34页 |
| 2.8 技术路线 | 第34-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-54页 |
| 3.1 目的基因序列分析 | 第35-38页 |
| 3.1.1 GmTGA4基因序列分析利用 | 第35-36页 |
| 3.1.2 GmbHLH93基因序列分析 | 第36-37页 |
| 3.1.3 GmWRI1基因序列分析 | 第37-38页 |
| 3.2 目的基因的克隆 | 第38-39页 |
| 3.2.1 大豆根瘤总RNA提取 | 第38页 |
| 3.2.2 目的片段的扩增 | 第38-39页 |
| 3.2.3 载体的构建 | 第39页 |
| 3.3 组织特异性表达 | 第39-43页 |
| 3.3.1 GmTGA4组织特异性表达分析 | 第39-40页 |
| 3.3.2 GmbHLH93组织特异性表达分析 | 第40-41页 |
| 3.3.3 GmWRI1组织特异性表达分析 | 第41-42页 |
| 3.3.4 GmTGA4、GmbHLH93、GmWRI1在根瘤不同发育时期的表达 | 第42-43页 |
| 3.4 目的基因的功能验证 | 第43-49页 |
| 3.4.1 GmTGA4, GmbHLH93、GmWRI1的功能验证 | 第43-46页 |
| 3.4.2 GmTGA4对GmSymRK、GmNSP1、GmNODULIN27的影响 | 第46-47页 |
| 3.4.3 GmbHLH93对GmSymRK、GmNSP1、GmNODULIN27的影响 | 第47-48页 |
| 3.4.4 GmWRI1对GmSymRK, GmNSP1、GmNODULIN27的影响 | 第48-49页 |
| 3.5 酵母双杂交筛选GmTGA4互作蛋白 | 第49-54页 |
| 3.5.1 大豆根瘤文库的构建及提取 | 第49页 |
| 3.5.2 GmTGA4目的基因克隆 | 第49-50页 |
| 3.5.3 目的片段与T-easy载体连接 | 第50页 |
| 3.5.4 诱饵载体的构建 | 第50-51页 |
| 3.5.5 诱饵载体转化酵母菌株 | 第51页 |
| 3.5.6 载体自激活验证 | 第51-52页 |
| 3.5.7 酵母双杂交筛选根瘤文库及蓝白斑筛选 | 第52页 |
| 3.5.8 X-α-Gal活性测定 | 第52-53页 |
| 3.5.9 BIFC验证 | 第53-54页 |
| 4 结果与讨论 | 第54-57页 |
| 4.1 结果 | 第54-55页 |
| 4.2 讨论 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-61页 |
| 附录 | 第61-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
