| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 前言 | 第10-17页 |
| 1 几丁质 | 第10-12页 |
| 1.1 几丁质简介 | 第10-11页 |
| 1.2 几丁质降解途径 | 第11-12页 |
| 2 昆虫几丁质脱乙酰酶 | 第12-15页 |
| 2.1 昆虫几丁质脱乙酰酶的结构 | 第12-13页 |
| 2.2 昆虫几丁质脱乙酰酶的研究进展 | 第13-15页 |
| 3 斜纹夜蛾概况 | 第15页 |
| 4 本研究的目的及意义 | 第15-17页 |
| 第二章 材料与方法 | 第17-37页 |
| 1 材料 | 第17-20页 |
| 1.1 供试昆虫 | 第17页 |
| 1.2 分子试剂及表达载体系统 | 第17-18页 |
| 1.3 主要仪器和设备 | 第18-19页 |
| 1.4 其他试剂 | 第19-20页 |
| 2 方法 | 第20-37页 |
| 2.1 溶液配制 | 第20-23页 |
| 2.2 斜纹夜蛾几丁质脱乙酰酶基因的克隆 | 第23-25页 |
| 2.2.1 PCR扩增 | 第23页 |
| 2.2.2 PCR产物胶回收 | 第23-24页 |
| 2.2.3 感受态细胞的制备 | 第24页 |
| 2.2.4 连接与转化 | 第24页 |
| 2.2.5 菌液PCR | 第24-25页 |
| 2.2.6 质粒提取 | 第25页 |
| 2.3 斜纹夜蛾几丁质脱乙酰酶序列分析 | 第25-27页 |
| 2.3.1 RNA提取 | 第25-26页 |
| 2.3.2 cDNA合成 | 第26页 |
| 2.3.3 PCR扩增 | 第26页 |
| 2.3.4 cDNA序列克隆 | 第26页 |
| 2.3.5 几丁质脱乙酰酶基因结构分析 | 第26页 |
| 2.3.6 几丁质脱乙酰酶氨基酸序列分析 | 第26-27页 |
| 2.3.7 几丁质脱乙酰酶系统发育分析 | 第27页 |
| 2.4 斜纹夜蛾几丁质脱乙酰酶基因表达量分析 | 第27-28页 |
| 2.4.1 RNA提取 | 第27页 |
| 2.4.2 cDNA合成 | 第27页 |
| 2.4.3 qRT-PCR引物扩增效率测定 | 第27-28页 |
| 2.4.4 斜纹夜蛾不同时期不同组织中几丁质脱乙酰酶基因的表达量 | 第28页 |
| 2.5 斜纹夜蛾几丁质脱乙酰酶基因的RNA干扰 | 第28-30页 |
| 2.5.1 dsRNA的体外合成 | 第28-30页 |
| 2.5.2 dsRNA注射与检测 | 第30页 |
| 2.6 斜纹夜蛾几丁质脱乙酰酶蛋白真核表达 | 第30-36页 |
| 2.6.1 双酶切 | 第30-31页 |
| 2.6.2 表达载体构建 | 第31-32页 |
| 2.6.3 重组bacmid构建 | 第32页 |
| 2.6.4 重组病毒的扩增 | 第32页 |
| 2.6.5 硫酸铵分级沉淀蛋白质 | 第32-33页 |
| 2.6.6 重组蛋白纯化 | 第33页 |
| 2.6.7 重组蛋白脱盐 | 第33-34页 |
| 2.6.8 重组蛋白浓度测定 | 第34页 |
| 2.6.9 重组蛋白SDS-PAGE鉴定 | 第34-35页 |
| 2.6.10 重组蛋白Western Blotting鉴定 | 第35页 |
| 2.6.11 重组蛋白几丁质结合活性测定 | 第35-36页 |
| 2.7 统计分析 | 第36-37页 |
| 第三章 实验结果 | 第37-47页 |
| 1 斜纹夜蛾几丁质脱乙酰酶基因分子克隆 | 第37页 |
| 2 斜纹夜蛾几丁质脱乙酰酶序列分析 | 第37-39页 |
| 3 斜纹夜蛾几丁质脱乙酰酶基因表达量分析 | 第39-42页 |
| 4 斜纹夜蛾几丁质脱乙酰酶RNA干扰结果分析 | 第42-43页 |
| 5 斜纹夜蛾几丁质脱乙酰酶重组蛋白真核表达 | 第43-45页 |
| 6 斜纹夜蛾几丁质脱乙酰酶重组蛋白与几丁质结合活性测定 | 第45页 |
| 7 小结 | 第45-47页 |
| 第四章 全文总结 | 第47-50页 |
| 1 总结与讨论 | 第47-49页 |
| 2 展望 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
| 攻读硕士期间论文发表情况 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
