| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第一章 绪论 | 第13-49页 |
| 1.1 引言 | 第13页 |
| 1.2 结核分枝杆菌及其感染现状 | 第13-15页 |
| 1.2.1 结核分枝杆菌概述 | 第13-14页 |
| 1.2.2 结核病现状概述 | 第14-15页 |
| 1.3 c-di-GMP研究进展 | 第15-27页 |
| 1.3.1 c-di-GMP的合成和水解 | 第16-17页 |
| 1.3.2 胞内c-di-GMP的调节 | 第17-20页 |
| 1.3.2.1 GGDEF和EAL连接的相互作用调节 | 第17-19页 |
| 1.3.2.2 酶稳定性的改变来调节c-di-GMP代谢 | 第19页 |
| 1.3.2.3 控制酶的细胞定位来调节c-di-GMP | 第19页 |
| 1.3.2.4 dgc和pde基因的转录调控 | 第19-20页 |
| 1.3.3 c-di-GMP赋予细菌的生物学活性 | 第20-24页 |
| 1.3.3.1 c-di-GMP调控生物膜的形成 | 第20-22页 |
| 1.3.3.2 毒力基因表达的调控 | 第22-24页 |
| 1.3.4 c-di-GMP的作用模式受体 | 第24-27页 |
| 1.3.4.1 PilZ结构域 | 第24-26页 |
| 1.3.4.2 PelD操纵子 | 第26页 |
| 1.3.4.3 核糖开关 | 第26页 |
| 1.3.4.4 LapD蛋白 | 第26-27页 |
| 1.4 细菌休眠与MTB感染 | 第27-38页 |
| 1.4.1 潜伏与休眠概述 | 第28-30页 |
| 1.4.2 感染过程休眠的重要性 | 第30页 |
| 1.4.3 休眠的动物感染模型 | 第30-33页 |
| 1.4.4 休眠的分子机制 | 第33-34页 |
| 1.4.5 复苏的分子机制 | 第34-36页 |
| 1.4.6 休眠在人类疾病中的作用 | 第36-38页 |
| 1.5 MTB在吞噬体内的生存策略 | 第38-46页 |
| 1.5.1 氧化和硝化应激 | 第38-39页 |
| 1.5.2 ROI和RNI的解毒 | 第39-42页 |
| 1.5.3 蛋白修复和降解 | 第42-43页 |
| 1.5.4 DNA修复,保护和突变 | 第43-44页 |
| 1.5.5 吞噬体酸化对MTB的影响 | 第44-45页 |
| 1.5.6 抗酸机制 | 第45-46页 |
| 1.6 本课题的研究目的 | 第46-49页 |
| 第二章 结核分枝杆菌二级信使环二鸟苷酸的生理功能 | 第49-93页 |
| 2.1 引言 | 第49-51页 |
| 2.2 实验材料与方法 | 第51-69页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第51-60页 |
| 2.2.1.1 实验菌株与载体 | 第51-53页 |
| 2.2.1.2 实验所用引物 | 第53-57页 |
| 2.2.1.3 实验所用试剂 | 第57-58页 |
| 2.2.1.4 培养基及溶液配制 | 第58-60页 |
| 2.2.1.5 主要仪器及材料 | 第60页 |
| 2.2.1.6 实验用细胞和动物 | 第60页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第60-69页 |
| 2.2.2.1 化学转化感受态大肠杆菌的制备 | 第60-61页 |
| 2.2.2.2 大肠杆菌化学转化 | 第61页 |
| 2.2.2.3 结核分枝杆菌电转化感受态制备 | 第61页 |
| 2.2.2.4 结核分枝杆菌的电转化 | 第61-62页 |
| 2.2.2.5 结核分枝杆菌RNA抽提 | 第62页 |
| 2.2.2.6 RNA反转录实验 | 第62页 |
| 2.2.2.7 实时荧光定量PCR实验(SYBR Premix Ex Taq TM) | 第62-63页 |
| 2.2.2.8 质粒构建 | 第63-64页 |
| 2.2.2.8.1 各基因敲除质粒的构建 | 第63页 |
| 2.2.2.8.2 基因回补质粒的构建 | 第63页 |
| 2.2.2.8.3 各基因表达质粒的构建 | 第63-64页 |
| 2.2.2.9 体外蛋白表达和纯化 | 第64-65页 |
| 2.2.2.10 c-di-GMP合成酶活性分析 | 第65页 |
| 2.2.2.11 突变及互补菌株的构建 | 第65-66页 |
| 2.2.2.12 结核分枝杆菌的生物膜形成实验 | 第66页 |
| 2.2.2.13 结核分枝杆菌的体外压力试验 | 第66页 |
| 2.2.2.14 基因芯片 | 第66页 |
| 2.2.2.15 结核分枝杆菌的体外快速厌氧休眠模型 | 第66-67页 |
| 2.2.2.16 胞内NAD和NADH分析 | 第67页 |
| 2.2.2.17 DNA染色和荧光素酶活体染色 | 第67-68页 |
| 2.2.2.18 THP-1细胞感染实验 | 第68页 |
| 2.2.2.19 结核分枝杆菌动物感染实验 | 第68-69页 |
| 2.2.2.20 感染小鼠肺、脾脏组织切片及HE染色 | 第69页 |
| 2.3 实验结果 | 第69-87页 |
| 2.3.1 MTB中含有c-di-GMP合成酶和降解酶结构域的基因 | 第69-70页 |
| 2.3.2 MTB中c-di-GMP的受体蛋白预测 | 第70-71页 |
| 2.3.3 MRA_1362&Rv1354c基因编码的蛋白具有合成c-di-GMP的功能 | 第71-72页 |
| 2.3.4 MTBH37Ra中基因敲除株的筛选及生理功能研究 | 第72-83页 |
| 2.3.4.1 敲除株筛选 | 第72-73页 |
| 2.3.4.2 体外培养过程生长未受影响 | 第73页 |
| 2.3.4.3 c-di-GMP调控MTB生物膜发育 | 第73-75页 |
| 2.3.4.4 突变株能调控部分DosR基因表达 | 第75-80页 |
| 2.3.4.5 △Ra1362厌氧生存能力减弱 | 第80-83页 |
| 2.3.5 MTB H37Rv中基因敲除株的筛选及生理功能研究 | 第83-87页 |
| 2.3.5.1 MTB △Rv1357c与△Rv1354c-GAF和△Rv1354c-GGDEF基因敲除株的筛选 | 第83-84页 |
| 2.3.5.2 MTB在巨噬细胞内增殖能力不变 | 第84-85页 |
| 2.3.5.3 MTB△Rv1357c基因敲除株在小鼠体内致病性增强 | 第85-87页 |
| 2.4 讨论 | 第87-93页 |
| 参考文献 | 第93-111页 |
| 附录 | 第111-113页 |
| 致谢 | 第113-115页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 | 第115页 |
