| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-14页 |
| 第一部分 TcLr19 与叶锈菌互作早期的酵母双杂交cDNA 文库构建 | 第14-31页 |
| 1 引言 | 第14-16页 |
| 2 材料与方法 | 第16-23页 |
| ·主要仪器及供试材料 | 第16-17页 |
| ·试验仪器 | 第16页 |
| ·供试试剂 | 第16页 |
| ·植物材料及菌种 | 第16页 |
| ·供试小麦幼苗的培养与接种 | 第16页 |
| ·试验涉及的培养基 | 第16-17页 |
| ·总RNA 提取和双链cDNA 的合成 | 第17-19页 |
| ·TcLr19 的培养和取样 | 第17页 |
| ·总RNA 提取与检测 | 第17-18页 |
| ·双链cDNA 的合成 | 第18-19页 |
| ·双链cDNA 的纯化(CHROMA SPIN~(TM)TE- 400 Column 柱分离法) | 第19-20页 |
| ·同源转化酵母菌株Y187 | 第20-21页 |
| ·制备酵母感受态细胞 | 第20页 |
| ·转化酵母菌株Y187 | 第20-21页 |
| ·在SD/-Leu 培养基上筛选转化菌株 | 第21页 |
| ·文库插入片段大小检测 | 第21-23页 |
| 3 结果与分析 | 第23-26页 |
| ·总RNA 的提取及检测 | 第23页 |
| ·双链cDNA 的合成及纯化 | 第23-24页 |
| ·文库的鉴定 | 第24-26页 |
| ·文库的转化效率 | 第24页 |
| ·文库的保存及滴度的测定 | 第24页 |
| ·文库重组比的鉴定 | 第24-26页 |
| 4 讨论 | 第26-28页 |
| ·建立酵母双杂交cDNA 文库的必要性 | 第26页 |
| ·优质酵母文库是进一步研究小麦抗叶锈病分子机制的基础 | 第26-27页 |
| ·低丰度cDNA 克隆 | 第27-28页 |
| 5 结论 | 第28-29页 |
| 参考文献 | 第29-31页 |
| 第二部分 TaTCTP 在小麦与叶锈菌互作过程中的表达分析 | 第31-68页 |
| 1 引言 | 第31-34页 |
| 2 材料与方法 | 第34-50页 |
| ·主要仪器及供试材料 | 第34-35页 |
| ·试验仪器 | 第34页 |
| ·供试试剂 | 第34页 |
| ·材料 | 第34页 |
| ·供试小麦幼苗的培养与接种 | 第34-35页 |
| ·试验涉及的培养基 | 第35页 |
| ·Western blotting 涉及的试剂 | 第35页 |
| ·TaTCTP 基因的PCR 扩增与表达载体的构建 | 第35-41页 |
| ·总RNA 提取和cDNA 第一链的合成 | 第35-37页 |
| ·引物设计 | 第37页 |
| ·TaTCTP 基因的PCR 扩增与表达载体的构建 | 第37-41页 |
| ·TaTCTP 的原核表达 | 第41-42页 |
| ·TaTCTP 的原核表达条件的探索 | 第41页 |
| ·SDS-PAGE 检测目的蛋白的表达 | 第41-42页 |
| ·TaTCTP 特异性的抗体制备与鉴定 | 第42-45页 |
| ·TaTCTP 融合蛋白的大量诱导表达及SDS-PAGE 检测 | 第42-43页 |
| ·TaTCTP 融合蛋白的纯化及SDS-PAGE 检测 | 第43页 |
| ·TaTCTP 融合蛋白抗血清的制备 | 第43-44页 |
| ·抗血清中抗体效价的检测 | 第44页 |
| ·抗血清鉴定 | 第44-45页 |
| ·小麦样品中总的可溶性蛋白的提取 | 第45页 |
| ·小麦TaTCTP 基因受叶锈菌侵染后的表达谱变化 | 第45-50页 |
| ·小麦受叶锈菌侵染后TaTCTP 基因在mRNA 水平的表达变化 | 第45-49页 |
| ·小麦受叶锈菌侵染后TaTCTP 基因在蛋白水平的表达变化 | 第49-50页 |
| 3 结果与分析 | 第50-63页 |
| ·TaTCTP 基因的PCR 扩增与表达载体的构建 | 第50-53页 |
| ·总RNA 完整性鉴定和RNA 浓度及纯度测定 | 第50-51页 |
| ·TaTCTP 基因的PCR 扩增 | 第51页 |
| ·表达载体构建 | 第51-53页 |
| ·TaTCTP 的原核表达 | 第53-55页 |
| ·小麦 TaTCTP 抗血清的制备及鉴定 | 第55-57页 |
| ·TaTCTP 融合蛋白的纯化 | 第55页 |
| ·TaTCTP 抗血清的制备 | 第55-56页 |
| ·TaTCTP 抗血清的鉴定 | 第56-57页 |
| ·小麦TaTCTP 基因应答叶锈菌侵染的转录本表达特征 | 第57-62页 |
| ·内参基因小麦actin 的实时荧光定量检测 | 第57-60页 |
| ·TaTCTP 的实时荧光定量检测 | 第60-62页 |
| ·小麦TaTCTP 基因应答叶锈菌侵染后在蛋白水平的变化 | 第62-63页 |
| 4 讨论 | 第63-67页 |
| ·开展TaTCTP 功能研究的必要性 | 第63页 |
| ·TaTCTP 基因的原核表达及抗体制备 | 第63-65页 |
| ·载体选择的重要性 | 第63-64页 |
| ·IPTG 诱导重组蛋白表达条件的优化 | 第64页 |
| ·重组蛋白纯化过程中的一些问题 | 第64页 |
| ·抗血清特异性检测的必要性 | 第64-65页 |
| ·TaTCTP 基因应答叶锈菌刺激的表达谱分析 | 第65-67页 |
| 5 结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-73页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第73-74页 |
| 作者简历 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
