| 摘要 | 第9-12页 |
| ABSTRACT | 第12-15页 |
| 第1章 文献综述 | 第16-36页 |
| 1.1 植物病害的危害 | 第16页 |
| 1.2 植物病原菌的类型 | 第16-17页 |
| 1.3 植物的防御机制 | 第17-19页 |
| 1.4 植物激素在防御途径的作用 | 第19-21页 |
| 1.4.1 JA介导的防御途径 | 第19-20页 |
| 1.4.2 ET介导的防御途径 | 第20页 |
| 1.4.3 SA介导的防御途径 | 第20-21页 |
| 1.5 SA，JA和ET抗病通路的关系 | 第21-23页 |
| 1.5.1 JA途径和ET途径的关系 | 第21页 |
| 1.5.2 SA途径和ET途径的关系 | 第21-22页 |
| 1.5.3 SA途径和JA途径的关系 | 第22-23页 |
| 1.6 WRKY转录因子 | 第23-33页 |
| 1.6.1 WRKY结构域和W盒 | 第25-26页 |
| 1.6.2 WRKY结构域的分类及起源 | 第26-29页 |
| 1.6.3 WRKY转录因子的生物学功能 | 第29-33页 |
| 1.7 杨树抗病性的研究 | 第33-36页 |
| 第2章 绪论 | 第36-40页 |
| 2.1 选题依据、研究目的与意义 | 第36页 |
| 2.2 拟解决的科学问题 | 第36-37页 |
| 2.3 研究内容和技术路线 | 第37-40页 |
| 第3章 杨树WRKY转录因子家族的生物信息学分析 | 第40-70页 |
| 3.1 引言 | 第40-41页 |
| 3.2 材料与方法 | 第41-46页 |
| 3.2.1 数据库搜索与检索 | 第41页 |
| 3.2.2 序列比对与系统发生树的构建 | 第41-42页 |
| 3.2.3 染色体定位 | 第42页 |
| 3.2.4 核定位信号和保守基序预测 | 第42页 |
| 3.2.5 启动子元件预测 | 第42页 |
| 3.2.6 植物材料和诱导处理 | 第42-43页 |
| 3.2.7 RNA的提取 | 第43页 |
| 3.2.8 RNA的反转录 | 第43-45页 |
| 3.2.9 数字化转录组分析 | 第45页 |
| 3.2.10 荧光定量PCR和半定量PCR | 第45-46页 |
| 3.2.11 引物设计 | 第46页 |
| 3.3 结果与分析 | 第46-66页 |
| 3.3.1 杨树WRKY基因的鉴定 | 第46-48页 |
| 3.3.2 杨树WRKY基因的可变剪切 | 第48-50页 |
| 3.3.3 杨树WRKY转录因子成员的分类和系统发生关系 | 第50-53页 |
| 3.3.4 杨树WRKY基因存在保守内含子插入位点 | 第53-54页 |
| 3.3.5 杨树WRKY基因的染色体定位 | 第54-56页 |
| 3.3.6 杨树WRKY转录因子的核定位信号和保守基序 | 第56-59页 |
| 3.3.7 杨树WRKY基因启动子元件分析 | 第59-60页 |
| 3.3.8 转录组测序分析杨树WRKY基因对不同处理的应答 | 第60-63页 |
| 3.3.9 杨树WRKY基因的组织表达谱 | 第63-65页 |
| 3.3.10 不同处理下18个杨树WRKY基因的表达情况 | 第65-66页 |
| 3.3.11 SA可以快速诱导PtrWRKY60和Ptr WRKY89的表达 | 第66页 |
| 3.4 讨论 | 第66-70页 |
| 第4章 PtrWRKY89在杨树SA信号通路中的生物学功能 | 第70-104页 |
| 4.1 引言 | 第70-71页 |
| 4.2 材料与方法 | 第71-88页 |
| 4.2.1 植物材料 | 第71页 |
| 4.2.2 菌种和质粒 | 第71页 |
| 4.2.3 试剂及试剂盒 | 第71-72页 |
| 4.2.4 激素和抗生素 | 第72页 |
| 4.2.5 植物培养基及细菌真菌培养基 | 第72-73页 |
| 4.2.6 质粒提取试剂 | 第73页 |
| 4.2.7 其它试剂 | 第73-75页 |
| 4.2.8 仪器设备 | 第75-76页 |
| 4.2.9 目的片段扩增、回收、加“A”和连接反应 | 第76-78页 |
| 4.2.10 CaCl_2法制备大肠杆菌DH5a感受态细胞 | 第78页 |
| 4.2.11 连接反应物及重组质粒转化大肠杆菌感受态细胞 | 第78页 |
| 4.2.12 转化单克隆菌落的PCR检测 | 第78-79页 |
| 4.2.13 阳性单克隆的扩大培养与质粒提取 | 第79-80页 |
| 4.2.14 植物表达载体的农杆菌转化 | 第80-81页 |
| 4.2.15 酵母表达载体构建及转化 | 第81-84页 |
| 4.2.16 显色反应 | 第84页 |
| 4.2.17 毛白杨的遗传转化 | 第84-85页 |
| 4.2.18 CTAB法提取杨树DNA | 第85-86页 |
| 4.2.19 PCR法鉴定转基因杨树 | 第86页 |
| 4.2.20 拟南芥的遗传转化 | 第86页 |
| 4.2.21 洋葱表皮细胞的遗传转化 | 第86-87页 |
| 4.2.22 拟南芥抗病实验 | 第87-88页 |
| 4.2.23 叶绿素测定 | 第88页 |
| 4.2.24 引物设计 | 第88页 |
| 4.3 结果与分析 | 第88-101页 |
| 4.3.1 PtrWRKY89的氨基酸序列比对 | 第88-89页 |
| 4.3.2 Ptr WRKY89的启动子分析 | 第89-90页 |
| 4.3.3 PtrWRKY89的亚细胞定位和转录激活活性 | 第90-92页 |
| 4.3.4 过量表达Ptr WRKY89对拟南芥抗病性的影响 | 第92-94页 |
| 4.3.5 过量表达Ptr WRKY89对拟南芥抗病基因的影响 | 第94-96页 |
| 4.3.6 过量表达Ptr WRKY89对毛白杨抗病性的影响 | 第96-98页 |
| 4.3.7 过量表达Ptr WRKY89对毛白杨抗病基因的影响 | 第98-99页 |
| 4.3.8 Ptr WRKY89对杨树WRKY家族IIa亚族成员表达的影响 | 第99-100页 |
| 4.3.9 Ptr WRKY18和PtrWRKY35是PtrWRKY89的靶基因 | 第100-101页 |
| 4.4 讨论 | 第101-104页 |
| 第5章 PtrWRKY18和PtrWRKY35对杨树SA信号通路的调控 | 第104-126页 |
| 5.1 引言 | 第104页 |
| 5.2 材料与方法 | 第104-108页 |
| 5.2.1 杨树叶锈病接种方法 | 第104-105页 |
| 5.2.2 DAB染色 | 第105页 |
| 5.2.3 引物设计 | 第105页 |
| 5.2.4 CRISPER载体构建 | 第105-107页 |
| 5.2.5 酵母cDNA文库的构建和筛选 | 第107-108页 |
| 5.3 结果与分析 | 第108-123页 |
| 5.3.1 PtrWRKY18和PtrWRKY35的氨基酸序列比对 | 第108-109页 |
| 5.3.2 Ptr WRKY18和PtrWRKY35的组织表达情况 | 第109-110页 |
| 5.3.3 PtrWRKY18和PtrWRKY35的亚细胞定位和转录激活活性验证 | 第110-111页 |
| 5.3.4 PtrWRKY18和PtrWRKY35的相互作用 | 第111-112页 |
| 5.3.5 过量表达Ptr WRKY18和PtrWRKY35对拟南芥抗病性的影响 | 第112-115页 |
| 5.3.6 过量表达Ptr WRKY18和PtrWRKY35对拟南芥抗病基因的影响 | 第115-116页 |
| 5.3.7 过量表达PtrWRKY18和PtrWRKY35的毛白杨及PtoWRKY18和Pto WRKY35的突变体 | 第116-118页 |
| 5.3.8 过量表达PtrWRKY18和PtrWRKY35杨树以及PtoWRKY18和Pto WRKY35突变体对杨树叶锈病的抗性 | 第118-119页 |
| 5.3.9 过量表达Ptr WRKY18和Ptr WRKY35杨树以及突变体中SA信号通路相关基因的表达情况 | 第119-120页 |
| 5.3.10 PtrWRKY18和PtrWRKY35与其它蛋白的相互作用 | 第120-123页 |
| 5.4 讨论 | 第123-126页 |
| 第6章 结论与展望 | 第126-130页 |
| 6.1 结论 | 第126-128页 |
| 6.2 特色与创新 | 第128页 |
| 6.3 展望 | 第128-130页 |
| 参考文献 | 第130-144页 |
| 附录 | 第144-148页 |
| 致谢 | 第148-150页 |
| 发表论文及参加课题一览表 | 第150-151页 |
