| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 中英文缩略词表 | 第14-15页 |
| 绪论 | 第15-17页 |
| 第一部分 甲基丙二酰辅酶A变位酶基因错义突变功能研究 | 第17-68页 |
| 引言 | 第17-18页 |
| 1. 对象与方法 | 第18-48页 |
| 1.1 对象 | 第18页 |
| 1.2 材料和试剂 | 第18-23页 |
| 1.2.1 主要仪器 | 第18-19页 |
| 1.2.2 主要试剂 | 第19-20页 |
| 1.2.3 主要试剂配制 | 第20-23页 |
| 1.3 实验方法 | 第23-47页 |
| 1.3.1 基因突变检测与分析 | 第23-27页 |
| 1.3.2 构建野生型pcDNA3.1-myc-hisC(+)-MUT质粒 | 第27-34页 |
| 1.3.3 构建8种MUT突变型表达载体 | 第34-37页 |
| 1.3.4 大量制备后续实验所需质粒 | 第37-38页 |
| 1.3.5 细胞培养 | 第38-40页 |
| 1.3.6 质粒瞬时转染细胞的蛋白获得 | 第40-42页 |
| 1.3.7 Western Blot检测不同质粒转染后细胞的MCM蛋白表达量 | 第42-44页 |
| 1.3.8 Realtime PCR考察不同质粒转染后细胞的MUT基因mRNA水平 | 第44-46页 |
| 1.3.9 通过UPLC分析MCM蛋白酶活性 | 第46-47页 |
| 1.4 统计方法 | 第47-48页 |
| 2. 结果 | 第48-64页 |
| 2.1 8例单纯型甲基丙二酸血症患者临床表型与MUT基因突变类型 | 第48-50页 |
| 2.2 8种MUT基因错义突变的预测分析结果 | 第50-57页 |
| 2.2.1 8种错义突变位点的氨基酸保守性分析 | 第50-51页 |
| 2.2.2 8种错义突变对蛋白结构和功能影响的预测分析 | 第51-57页 |
| 2.3 野生型和突变型MUT基因表达质粒构建 | 第57-59页 |
| 2.3.1 野生型表达质粒pcDNA3.1-myc-his(+)-MUT构建 | 第57-58页 |
| 2.3.2 8种错义突变型表达质粒构建 | 第58-59页 |
| 2.4 Western blot检测野生型和突变型MCM蛋白在293T细胞中的表达量 | 第59-61页 |
| 2.5 不同质粒转染后293T细胞MUT基因mRNA水平检测 | 第61-62页 |
| 2.6 不同质粒转染后细胞的MCM蛋白酶活性检测 | 第62-64页 |
| 3. 讨论 | 第64-67页 |
| 结论 | 第67-68页 |
| 第二部分 小鼠脑神经元经MMA诱导后凋亡变化及LncRNA表达与凋亡信号通路中相关mRNA关系分析 | 第68-146页 |
| 引言 | 第68-69页 |
| 1. 材料与方法 | 第69-84页 |
| 1.1 实验动物 | 第69页 |
| 1.2 神经元培养所需主要仪器设备及试剂、溶液的配置 | 第69-72页 |
| 1.2.1 主要仪器设备 | 第69页 |
| 1.2.2 主要试剂 | 第69-70页 |
| 1.2.3 主要试剂及溶液配置 | 第70-72页 |
| 1.3 基因芯片及主要仪器 | 第72页 |
| 1.4 其它主要试剂 | 第72-73页 |
| 1.5 方法 | 第73-83页 |
| 1.5.1 原代小鼠脑皮层神经元细胞培养 | 第73-74页 |
| 1.5.2 神经元纯度鉴定 | 第74-75页 |
| 1.5.3 甲基丙二酸诱导神经元 | 第75页 |
| 1.5.4 MTT法检测神经元活力 | 第75-76页 |
| 1.5.5 总RNA提取、纯化及质检 | 第76-77页 |
| 1.5.6 表达谱芯片检测 | 第77-81页 |
| 1.5.7 Real-time PCR检测Atf4及与其表达显著相关的6条Lnc RNA，验证芯片结果 | 第81-83页 |
| 1.6 统计学分析 | 第83-84页 |
| 2. 结果 | 第84-141页 |
| 2.1 小鼠神经元的培养及纯度鉴定 | 第84页 |
| 2.2 甲基丙二酸对神经元形态的影响 | 第84-86页 |
| 2.3 甲基丙二酸对小鼠神经元细胞活力的影响 | 第86-88页 |
| 2.4 芯片检测的各样本RNA质量检测结果 | 第88-89页 |
| 2.4.1 NanoDrop ND 1000检测RNA浓度及纯度 | 第88页 |
| 2.4.2 琼脂糖凝胶电泳检测RNA完整性 | 第88-89页 |
| 2.5 MMA诱导小鼠神经元表达谱芯片检测结果 | 第89-141页 |
| 2.5.1 芯片扫描 | 第89-117页 |
| 2.5.2 芯片数据标准化处理 | 第117-118页 |
| 2.5.3 芯片数据聚类分析结果 | 第118-119页 |
| 2.5.4 呈梯度差异变化的LncRNA和mRNA筛选 | 第119-134页 |
| 2.5.5 差异基因的基因功能富集（GO）分析 | 第134-136页 |
| 2.5.6 信号通路分析 | 第136-139页 |
| 2.5.7 LncRNA与MAPK信号通路中富集的mRNA相关性分析 | 第139-140页 |
| 2.5.8 芯片结果验证 | 第140-141页 |
| 3. 讨论 | 第141-145页 |
| 结论 | 第145-146页 |
| 参考文献 | 第146-152页 |
| 致谢 | 第152-153页 |
| 攻读学位期间撰写论文目录 | 第153页 |
