TAT-MT融合蛋白在大肠杆菌中的高效表达、纯化及体外活性初步测定
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第8-20页 |
| 1 金属硫蛋白研究进展 | 第8-14页 |
| ·MT的结构和理化性质 | 第9-10页 |
| ·MT的生物学功能 | 第10-14页 |
| 2 穿膜肽的研究进展 | 第14-18页 |
| ·穿膜肽简介 | 第14-15页 |
| ·穿膜肽的结构 | 第15-16页 |
| ·穿膜肽的穿膜机制 | 第16-17页 |
| ·穿膜肽的应用 | 第17-18页 |
| 3 论文背景 | 第18-19页 |
| 4 技术路线图 | 第19-20页 |
| 第二章 TAT-MT基因的克隆、表达和纯化 | 第20-45页 |
| 1 实验设备 | 第20-27页 |
| ·主要设备和器材 | 第20-21页 |
| ·DNA及蛋白材料 | 第21页 |
| ·实验菌株及细胞株 | 第21-22页 |
| ·培养基与抗生素 | 第22-24页 |
| ·实验试剂 | 第24-27页 |
| 2、实验方法与步骤 | 第27-45页 |
| ·基因的设计、扩增与克隆 | 第27-30页 |
| ·重组载体pET3c-Tat-MT的构建 | 第30-35页 |
| ·、Tat-MT在大肠杆菌中的表达 | 第35-37页 |
| ·、TAT-MT表达条件的筛选 | 第37-39页 |
| ·基因工程菌在发酵罐中的高效表达 | 第39-40页 |
| ·TA-TMT融合蛋白的分离纯化 | 第40-44页 |
| ·重组菌的原子吸收光谱测定 | 第44-45页 |
| 第三章 实验结果 | 第45-54页 |
| 1 基因的PCR扩增 | 第45页 |
| 2 重组质粒双酶切鉴定 | 第45-46页 |
| 3 重组克隆PCR鉴定结果 | 第46-47页 |
| 4. 序列分析测定 | 第47页 |
| 5. 重组蛋白的表达 | 第47-50页 |
| ·温度对表达的影响及可溶性分析 | 第47-48页 |
| ·培养基优化 | 第48-50页 |
| 6 基因工程菌的小试发酵 | 第50页 |
| 7 重组蛋白的纯化 | 第50-51页 |
| 8 Western blot鉴定 | 第51-52页 |
| 9 原子吸收光谱测定结果 | 第52-54页 |
| ·Cd~(2+)的吸收 | 第52-53页 |
| ·Cu~(2+)的吸收 | 第53-54页 |
| 第四章 讨论 | 第54-57页 |
| 1 MT的表达与条件优化 | 第54-55页 |
| 2 重组蛋白的检测与结果分析 | 第55页 |
| 3 下一步工作设想 | 第55-57页 |
| 第五章 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-63页 |
| 附录一 英文缩略词表 | 第63-64页 |
| 附录二 测序图谱 | 第64-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
