| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-22页 |
| 1.1 ACLSV分子特性研究 | 第12-13页 |
| 1.1.1 ACLSV基因组结构 | 第12-13页 |
| 1.1.2 ACLSV分子变异 | 第13页 |
| 1.2 常用的果树病毒的检测方法 | 第13-19页 |
| 1.2.1 血清学检测 | 第13-15页 |
| 1.2.2 分子生物学检测 | 第15-17页 |
| 1.2.3 实时荧光定量PT-PCR检测 | 第17-19页 |
| 1.3 植物病毒脱除方法 | 第19-21页 |
| 1.3.1 热处理法 | 第19页 |
| 1.3.2 茎尖培养脱毒法 | 第19页 |
| 1.3.3 化学药剂法 | 第19-20页 |
| 1.3.4 超低温脱毒法 | 第20页 |
| 1.3.5 不同处理方法结合脱毒法 | 第20-21页 |
| 1.4 本研究目的意义 | 第21-22页 |
| 2 山楂属植物中ACLSV检测方法的建立 | 第22-40页 |
| 2.1 植物材料与方法 | 第22-28页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第22页 |
| 2.1.2 试剂 | 第22页 |
| 2.1.3 RNA的提取 | 第22-23页 |
| 2.1.4 引物设计和RT-PCR反应体系 | 第23-24页 |
| 2.1.5 PCR产物的克隆、测序和序列分析 | 第24-25页 |
| 2.1.6 定量RT-PCR引物与TaqMan探针设计 | 第25页 |
| 2.1.7 阳性质粒标准品的构建 | 第25-27页 |
| 2.1.8 定量RT-PCR条件优化 | 第27页 |
| 2.1.9 定量RT-PCR标准曲线的建立与评价 | 第27-28页 |
| 2.2 结果与分析 | 第28-38页 |
| 2.2.1 山楂属植物中ACLSV的RT-PCR检测 | 第28-32页 |
| 2.2.1.1 ACLSV检测引物的设计和验证 | 第28-29页 |
| 2.2.1.2 RT-PCR体系的优化 | 第29-32页 |
| 2.2.2 重组质粒的鉴定 | 第32页 |
| 2.2.3 实时荧光定量RT-PCR体系优化 | 第32-33页 |
| 2.2.4 定量RT-PCR标准曲线的建立 | 第33-35页 |
| 2.2.5 定量RT-PCR重复性检测 | 第35页 |
| 2.2.6 定量RT-PCR实用性检测 | 第35-38页 |
| 2.2.6.1 山楂不同器官的ACLSV定量检测 | 第35-36页 |
| 2.2.6.2 山楂属植物ACLSV带毒率分析 | 第36-38页 |
| 2.3 讨论 | 第38-40页 |
| 2.3.1 定量RT-PCR的应用前景 | 第38-39页 |
| 2.3.2 解决实验污染的方法 | 第39-40页 |
| 3 基于山楂组培苗的ACLSV病毒脱除方法研究 | 第40-45页 |
| 3.1 材料和方法 | 第40-41页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第40页 |
| 3.1.2 山楂脱毒苗培育方法 | 第40-41页 |
| 3.1.2.1 山楂脱毒苗培育 | 第40页 |
| 3.1.2.2 化学处理 | 第40页 |
| 3.1.2.3 热处理 | 第40-41页 |
| 3.1.2.4 热处理与化学处理结合 | 第41页 |
| 3.2 结果与分析 | 第41页 |
| 3.3 讨论 | 第41-45页 |
| 3.3.1 木本植物RNA提取 | 第41-43页 |
| 3.3.2 果树病毒脱除方法研究 | 第43-45页 |
| 4 结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-52页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53页 |