| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 引言 | 第9-10页 |
| 1 绪论 | 第10-18页 |
| 1.1 昆虫杆状病毒表达载体系统 | 第10-14页 |
| 1.1.1 昆虫杆状病毒表达载体系统的建立与发展 | 第10-11页 |
| 1.1.2 杆状病毒表达载体系统构建的基本策略 | 第11-12页 |
| 1.1.3 杆状病毒表达载体系统的特点 | 第12-13页 |
| 1.1.4 柞蚕核型多角体病毒表达载体系统的发展及特点 | 第13-14页 |
| 1.2 人生长激素蛋白(hGH) | 第14-17页 |
| 1.2.1 人生长激素蛋白概括 | 第14-15页 |
| 1.2.2 hGH的生物学功能 | 第15-16页 |
| 1.2.3 hGH蛋白的应用研究 | 第16-17页 |
| 1.3 研究的目的及意义 | 第17-18页 |
| 2 重组病毒ApNPV-△ph/△egfp/high~+的构建与筛选 | 第18-36页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第18-20页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第18页 |
| 2.1.2 具酶与试剂 | 第18-19页 |
| 2.1.3 主要溶液配制 | 第19-20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-28页 |
| 2.2.1 ApNPV转移表达载体pApM748BE-hgh的构建 | 第20-25页 |
| 2.2.2 重组病毒ApNPV-△ph/egfp~+基因组DNA的提取 | 第25-26页 |
| 2.2.3 樗蚕蛹精巢细胞(PC-01)的复苏与培养 | 第26页 |
| 2.2.4 转移表达载体质粒pApM748BE/hgh与重组病毒ApNPV-△ph/egfp~+基因组DNA的共转染 | 第26-27页 |
| 2.2.5 重组病毒ApNPV-△ph/△egfp/hgh~+的筛选与PCR鉴定 | 第27-28页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第28-35页 |
| 2.3.1 ApNPV转移表达载体pApM748BE-hgh的鉴定 | 第28-32页 |
| 2.3.2 共转染与重组病毒的筛选结果 | 第32-35页 |
| 2.3.3 重组病毒ApNPV-△ph/△egfp/hgh~+的鉴定 | 第35页 |
| 2.4 小结 | 第35-36页 |
| 3 重组人生长激素在柞蚕蛹体内的表达及体外活性测定 | 第36-47页 |
| 3.1 材料与试剂 | 第36-38页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第36页 |
| 3.1.2 工具酶与试剂 | 第36-37页 |
| 3.1.3 主要溶液配制 | 第37-38页 |
| 3.2 实验方法 | 第38-41页 |
| 3.2.1 重组人生长激素蛋白在柞蚕蛹体内的表达 | 第38-39页 |
| 3.2.2 重组人生长激素蛋白的鉴定 | 第39-40页 |
| 3.2.3 重组人生长激素蛋白的定量检测 | 第40-41页 |
| 3.2.4 人红白血病细胞K562的复苏与培养 | 第41页 |
| 3.2.5 重组人生长激素蛋白体外活性的检测 | 第41页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第41-46页 |
| 3.3.1 重组人生长激素蛋白在柞蚕蛹体内的表达 | 第41-42页 |
| 3.3.2 重组人生长激素蛋白标准曲线 | 第42-43页 |
| 3.3.3 重组人生长激素蛋白的表达时相与表达量 | 第43-44页 |
| 3.3.4 重组人生长激素蛋白体外活性 | 第44-46页 |
| 3.4 小结 | 第46-47页 |
| 4 重组人生长激素蛋白分离纯化方法的初步建立 | 第47-52页 |
| 4.1 材料与试剂 | 第47-48页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第47页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第47-48页 |
| 4.2 实验方法 | 第48-50页 |
| 4.2.1 发病柞蚕蛹体液的预处理 | 第48页 |
| 4.2.2 利用Pierce Direct IP Kit分离纯化重组人生长激素蛋白 | 第48-50页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第50-51页 |
| 4.3.1 柞蚕蛹体液的预处理 | 第50-51页 |
| 4.3.2 重组人生长激素蛋白的免疫亲和分离 | 第51页 |
| 4.4 小结 | 第51-52页 |
| 主要结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-57页 |
| 附录 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
