| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 引言 | 第10-20页 |
| 1.1 嗜热噬菌体概况 | 第10-13页 |
| 1.1.1 嗜热噬菌体的国外研究现状 | 第10-11页 |
| 1.1.2 嗜热噬菌体的国内研究现状 | 第11-12页 |
| 1.1.3 嗜热噬菌体的分布概述 | 第12页 |
| 1.1.4 深海嗜热噬菌体GVE2的结构特征 | 第12-13页 |
| 1.2 核酸内切酶概述 | 第13-15页 |
| 1.2.1 核酸内切酶的研究进展 | 第13-14页 |
| 1.2.2 核酸内切酶的定义及分类 | 第14页 |
| 1.2.3 HNH核酸内切酶 | 第14-15页 |
| 1.3 蛋白质三维结构测定的主要方法及原理 | 第15-16页 |
| 1.3.1 晶体X射线衍射(X-ray diffraction)技术 | 第16页 |
| 1.3.2 溶液多维核磁共振(NMR)技术 | 第16页 |
| 1.3.3 冷冻电镜技术 | 第16页 |
| 1.4 蛋白质结晶的主要方法及原理 | 第16-18页 |
| 1.5 本文的主要研究内容及意义 | 第18-20页 |
| 第二章 GVE2 HNH核酸内切酶的表达纯化 | 第20-34页 |
| 2.1 材料和方法 | 第20-22页 |
| 2.1.1 实验用载体和菌株 | 第20页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.3 实验室仪器 | 第21页 |
| 2.1.4 实验常用酶 | 第21-22页 |
| 2.2 实验方法及步骤 | 第22-29页 |
| 2.2.1 目的基因的来源 | 第22页 |
| 2.2.2 超级感受态细胞Top10和BL21的制备 | 第22-23页 |
| 2.2.3 基因克隆 | 第23-26页 |
| 2.2.4 目的蛋白的表达纯化 | 第26-29页 |
| 2.3 实验结果分析 | 第29-34页 |
| 2.3.1 HNH核酸内切酶的Ni柱纯化结果分析 | 第29-30页 |
| 2.3.2 HNH蛋白分子筛纯化结果分析 | 第30-31页 |
| 2.3.3 HNH核酸内切酶离子交换层析结果分析 | 第31-32页 |
| 2.3.4 HNH核酸内切酶与DNA相互作用的鉴定 | 第32-34页 |
| 第三章 蛋白质结构的解析 | 第34-52页 |
| 3.1 实验材料 | 第34页 |
| 3.2 实验方法 | 第34-38页 |
| 3.2.1 晶体初筛 | 第34-35页 |
| 3.2.2 晶体的优化 | 第35-36页 |
| 3.2.3 晶体的后处理 | 第36-37页 |
| 3.2.4 HNH核酸内切酶与MnCl_2复合物晶体的初筛优化 | 第37页 |
| 3.2.5 数据的收集及处理 | 第37页 |
| 3.2.6 相位的解析 | 第37-38页 |
| 3.2.7 结构模型的搭建 | 第38页 |
| 3.2.8 结构的精修 | 第38页 |
| 3.3 实验结果分析 | 第38-52页 |
| 3.3.1 GVE2 HNH核酸内切酶(结合Zn~(2+)、结合Mn~(2+))晶体初筛结果分析 | 第38-39页 |
| 3.3.2 晶体优化的结果分析 | 第39-41页 |
| 3.3.3 数据的收集及处理 | 第41-43页 |
| 3.3.4 GVE2 HNHE的序列比对 | 第43-44页 |
| 3.3.5 GVE2 HNHE的二级结构预测 | 第44页 |
| 3.3.6 GVE2 HNHE的同源蛋白 | 第44-45页 |
| 3.3.7 GVE2 HNHE-Zn~(2+)整体结构 | 第45-46页 |
| 3.3.8 GVE2 HNHE、AnaCas9 HNHE和Gme HNHE三者结构的比较 | 第46-47页 |
| 3.3.9 GVE2 HNHE-Mn~(2+)整体结构 | 第47-49页 |
| 3.3.10 GVE2 HNHE的锌指结构域 | 第49页 |
| 3.3.11 GVE2 HNHE的活性中心 | 第49-52页 |
| 第四章 突变体H93A、N109A、H118A对GVE2 HNHE结构和功能的影响 | 第52-60页 |
| 4.1 实验材料和方法 | 第52-55页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第52页 |
| 4.1.2 对GVE2 HNHE突变体H93A、N109A、H118A的重新构建 | 第52-54页 |
| 4.1.3 GVE2 HNHE突变体H93A、N109A、H118A的表达纯化 | 第54页 |
| 4.1.4 DNA切割实验 | 第54页 |
| 4.1.5 圆二色谱实验 | 第54-55页 |
| 4.2 实验结果分析 | 第55-60页 |
| 4.2.1 突变体蛋白的表达纯化 | 第55-56页 |
| 4.2.2 突变体H93A、N109A、H118A对酶活性的影响 | 第56-58页 |
| 4.2.3 突变体对蛋白结构变化的影响 | 第58页 |
| 4.2.4 突变体蛋白热稳定性的改变 | 第58-60页 |
| 第五章 Mn~(2+)和Zn~(2+)对GVE2 HNHE的影响 | 第60-66页 |
| 5.1 实验材料和方法 | 第60-61页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第60页 |
| 5.1.2 实验方法 | 第60-61页 |
| 5.2 实验结果及分析 | 第61-66页 |
| 5.2.1 不同金属离子对GVE2 HNHE切割活性的影响 | 第61-62页 |
| 5.2.2 Mn~(2+)浓度对GVE2 HNHE切割活性的影响 | 第62-63页 |
| 5.2.3 Zn~(2+)浓度对GVE2 HNHE切割活性的影响 | 第63-64页 |
| 5.2.4 GVE2 HNHE对Mn~(2+)与Zn~(2+)的结合能力的比较 | 第64-66页 |
| 结论 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-74页 |
| 致谢 | 第74-76页 |
| 文章发表情况 | 第76页 |
