| 中文摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 符号说明 | 第9-10页 |
| 前言 | 第10-17页 |
| 研究现状、成果 | 第10-14页 |
| 研究目的、方法 | 第14-17页 |
| 一、构建严格调控BMP2表达的单质粒Tet-on载体 | 第17-30页 |
| 1 材料和方法 | 第17-23页 |
| 1.1 材料 | 第17-18页 |
| 1.1.1 主要实验材料 | 第17页 |
| 1.1.2 主要实验试剂 | 第17页 |
| 1.1.3 主要实验仪器 | 第17-18页 |
| 1.2 方法 | 第18-23页 |
| 1.2.1 大鼠 BMP2 基因 PCR 扩增 | 第18-19页 |
| 1.2.2 大鼠 BMP2 基因 PCR 产物的纯化 | 第19页 |
| 1.2.3 PCR 纯化的产物及 Tet-on 载体的双酶切 | 第19-20页 |
| 1.2.4 酶切的 Tet-on 载体与 PCR 酶切产物的的连接 | 第20-21页 |
| 1.2.5 质粒载体转化与鉴定 | 第21页 |
| 1.2.6 阳性单克隆扩大培养与重组质粒大提 | 第21-22页 |
| 1.2.7 重组质粒测序鉴定 | 第22页 |
| 1.2.8 包装含有 Tet-BMP2 载体的慢病毒颗粒 | 第22页 |
| 1.2.9 病毒的浓缩与滴度的测定 | 第22-23页 |
| 1.2.10 病毒感染 293T 细胞与 Dox 诱导 293T 细胞 GFP 表达 | 第23页 |
| 2 结果 | 第23-29页 |
| 2.1 大鼠BMP2基因PCR结果 | 第23-24页 |
| 2.2 Tet-on载体及大鼠BMP2的PCR扩增产物双酶切鉴定 | 第24-25页 |
| 2.3 菌落PCR鉴定结果 | 第25-26页 |
| 2.4 Tet-BMP2载体基因测序结果 | 第26-27页 |
| 2.5 不同浓度Dox诱导 293T细胞内GFP表达 | 第27-29页 |
| 3 讨论 | 第29页 |
| 4 小结 | 第29-30页 |
| 二、单质粒Tet-on系统对ADSCs调控作用的研究 | 第30-48页 |
| 1 材料和方法 | 第30-37页 |
| 1.1 材料 | 第30-31页 |
| 1.1.1 主要实验材料 | 第30页 |
| 1.1.2 主要实验试剂 | 第30页 |
| 1.1.3 主要实验仪器 | 第30-31页 |
| 1.2 方法 | 第31-37页 |
| 1.2.1 ADSCs提取与培养 | 第31页 |
| 1.2.2 ADSCs流式鉴定 | 第31页 |
| 1.2.3 ADSCs多向分化潜能的鉴定 | 第31-32页 |
| 1.2.4 Dox浓度对ADSCs增值与凋亡的影响 | 第32页 |
| 1.2.5 不同浓度Dox诱导ADSCs内GFP表达 | 第32页 |
| 1.2.6 不同浓度Dox诱导ADSCs内BMP2表达的检测 | 第32-33页 |
| 1.2.7 不同浓度Dox诱导ADSCs内成骨相关基因的表达的检 | 第33页 |
| 1.2.8 不同浓度 Dox 诱导 ADSCs 内 GFP 表达 | 第33页 |
| 1.2.9 不同浓度 Dox 诱导 ADSCs 内 BMP2 表达的检测 | 第33-35页 |
| 1.2.10 不同浓度 Dox 诱导 ADSCs 内成骨相关基因的表达的检测 | 第35-37页 |
| 2 结果 | 第37-42页 |
| 2.1 ADSCs提取及多向分化潜能的鉴定 | 第37页 |
| 2.2 ADSCs表面Marker鉴定 | 第37-38页 |
| 2.3 Dox浓度对ADSCs增殖、凋亡的影响 | 第38-39页 |
| 2.4 不同浓度Dox诱导ADSCs内BMP2表达 | 第39-40页 |
| 2.5 不同浓度Dox对ADSCs成骨分化的影响 | 第40-41页 |
| 2.6 不同浓度Dox对ADSCs胞成骨分化相关基因的影响 | 第41-42页 |
| 2.7 不同浓度 Dox 对 ADSCs 成骨分化相关基因的影响 | 第42页 |
| 3 讨论 | 第42-46页 |
| 4 小结 | 第46-48页 |
| 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-55页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第55-56页 |
| 附录 | 第56-57页 |
| 综述 生长因子调控的研究进展 | 第57-69页 |
| 参考文献 | 第64-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
