| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-24页 |
| 1.1 葡萄遗传转化体系研究 | 第15-16页 |
| 1.1.1 葡萄再生体系研究 | 第15页 |
| 1.1.2 葡萄遗传转化途径研究 | 第15-16页 |
| 1.2 天冬氨酸蛋白酶家族研究 | 第16-22页 |
| 1.2.1 植物天冬氨酸蛋白酶的结构组成 | 第17-18页 |
| 1.2.2 植物天冬氨酸蛋白酶的加工和失活机制 | 第18页 |
| 1.2.3 植物天冬氨酸蛋白酶的分布和定位 | 第18-20页 |
| 1.2.4 植物天冬氨酸蛋白酶的生物学功能 | 第20-22页 |
| 1.3 本研究的目的与意义 | 第22-24页 |
| 第二章 葡萄再生体系的建立与遗传转化体系的初探 | 第24-34页 |
| 2.1 材料 | 第24页 |
| 2.1.1 葡萄材料 | 第24页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第24页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第24页 |
| 2.1.4 菌株 | 第24页 |
| 2.2 方法 | 第24-27页 |
| 2.2.1 外植体采集与消毒 | 第24-25页 |
| 2.2.2 胚性愈伤组织诱导 | 第25页 |
| 2.2.3 体细胞胚的诱导 | 第25-26页 |
| 2.2.4 胚性细胞悬浮液的建立与保存 | 第26页 |
| 2.2.5 体细胞胚的萌发与成苗 | 第26页 |
| 2.2.6 葡萄植株的炼苗与移栽 | 第26页 |
| 2.2.7 葡萄胚状体转基因体系初探 | 第26-27页 |
| 2.2.8 数据统计分析 | 第27页 |
| 2.3 结果与分析 | 第27-32页 |
| 2.3.1 消毒次数对外植体污染率的影响 | 第27页 |
| 2.3.2 基因型、外植体和培养基类型对胚性愈伤组织诱导率的影响 | 第27-29页 |
| 2.3.3 培养基类型对体细胞胚诱导的影响 | 第29页 |
| 2.3.4 子叶切除对体细胞胚萌发的影响 | 第29页 |
| 2.3.5 农杆菌侵染后体细胞胚胎的变化 | 第29-32页 |
| 2.4 讨论 | 第32-34页 |
| 2.4.1 葡萄胚状体发生途径再生体系的建立与优化 | 第32-33页 |
| 2.4.2 葡萄遗传转化体系初探 | 第33-34页 |
| 第三章 葡萄天冬氨酸蛋白酶家族基因的进化和表达分析 | 第34-59页 |
| 3.1 材料 | 第34页 |
| 3.1.1 葡萄材料 | 第34页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第34页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第34页 |
| 3.2 方法 | 第34-37页 |
| 3.2.1 葡萄AP家族基因的搜索和注释 | 第34页 |
| 3.2.2 葡萄AP家族基因的染色体定位和同线性分析 | 第34页 |
| 3.2.3 序列的多重比较和进化树分析 | 第34-35页 |
| 3.2.4 葡萄AP家族基因的蛋白质和外显子/内含子结构分析 | 第35页 |
| 3.2.5 葡萄AP基因的信号定位预测 | 第35页 |
| 3.2.6 葡萄材料的非生物胁迫，生物胁迫及激素处理 | 第35-36页 |
| 3.2.7 半定量RT-PCR和实时定量PCR分析 | 第36-37页 |
| 3.3 结果与分析 | 第37-53页 |
| 3.3.1 葡萄基因组中AP基因的搜索与鉴定 | 第37-39页 |
| 3.3.2 葡萄AP基因家族的扩增形式 | 第39-40页 |
| 3.3.3 葡萄和拟南芥中AP基因的同线关系 | 第40-42页 |
| 3.3.4 葡萄与拟南芥中AP基因的进化分析 | 第42-44页 |
| 3.3.5 葡萄AP基因的序列和结构分析 | 第44-46页 |
| 3.3.6 葡萄AP基因信号定位的预测 | 第46-47页 |
| 3.3.7 葡萄AP基因在不同组织中的表达分析 | 第47页 |
| 3.3.8 葡萄AP基因在不同胁迫和外源激素处理后的表达分析 | 第47-53页 |
| 3.4 讨论 | 第53-59页 |
| 3.4.1 大片段染色体复制和串联重复促进葡萄AP基因家族的扩增 | 第54页 |
| 3.4.2 葡萄AP基因结构的保守性与多样性 | 第54页 |
| 3.4.3 葡萄中串联重复和大片段染色体复制的 AP 基因的功能的保守性与多样性 | 第54-56页 |
| 3.4.4 葡萄和拟南芥中 AP 蛋白的进化与葡萄 AP 基因的功能预测 | 第56页 |
| 3.4.5 葡萄AP蛋白在多种生物过程中起重要作用 | 第56-59页 |
| 第四章 葡萄AP17 基因功能分析 | 第59-79页 |
| 4.1 材料 | 第59页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第59页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第59页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第59页 |
| 4.1.4 菌株 | 第59页 |
| 4.2 方法 | 第59-64页 |
| 4.2.1 葡萄AP17 cDNA序列的克隆 | 第59-60页 |
| 4.2.2 葡萄AP17 基因转化拟南芥 | 第60-62页 |
| 4.2.3 拟南芥转基因株系的种子萌发率分析 | 第62页 |
| 4.2.4 拟南芥转基因株系的渗透胁迫处理 | 第62页 |
| 4.2.5 叶绿素含量、相对电导率、丙二醛及内源ABA含量的测定 | 第62-63页 |
| 4.2.6 失水率的测定 | 第63页 |
| 4.2.7 检测活性氧积累及细胞死亡情况 | 第63页 |
| 4.2.8 抗氧化酶含量的测定 | 第63-64页 |
| 4.2.9 ABA处理对气孔开度的影响 | 第64页 |
| 4.2.10 实时定量RT-PCR | 第64页 |
| 4.3 结果与分析 | 第64-76页 |
| 4.3.1 葡萄AP17 基因的序列和结构分析 | 第64-66页 |
| 4.3.2 拟南芥转基因株系的检测 | 第66-67页 |
| 4.3.3 渗透胁迫对VlAP17 转基因拟南芥株系发芽率的影响 | 第67-69页 |
| 4.3.4 渗透胁迫对VlAP17 转基因拟南芥幼苗长势和生理特征的影响 | 第69-71页 |
| 4.3.5 过量表达VlAP17 的转基因拟南芥成龄苗对非生物胁迫的响应 | 第71-75页 |
| 4.3.6 VlAP17 转基因拟南芥植株中响应非生物胁迫的基因表达分析 | 第75-76页 |
| 4.4 讨论 | 第76-79页 |
| 第五章 葡萄AP13 基因功能分析 | 第79-103页 |
| 5.1 材料 | 第79页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第79页 |
| 5.1.2 病原菌 | 第79页 |
| 5.1.3 主要试剂 | 第79页 |
| 5.2 方法 | 第79-83页 |
| 5.2.1 中国野生毛葡萄‘商-24’的激素处理及生物胁迫 | 第79页 |
| 5.2.2 葡萄AP13 基因cDNA序列的克隆 | 第79-80页 |
| 5.2.3 葡萄AP13 基因转化拟南芥 | 第80页 |
| 5.2.4 转基因拟南芥叶片接种病原菌 | 第80-81页 |
| 5.2.5 胼胝质的观察 | 第81页 |
| 5.2.6 PstDC3000 接种后的菌落计数 | 第81页 |
| 5.2.7 实时定量RT-PCR | 第81-82页 |
| 5.2.8 VqAP13 启动子序列的克隆及瞬时表达载体构建 | 第82页 |
| 5.2.9 VqAP13 启动子活性分析 | 第82-83页 |
| 5.3 结果与分析 | 第83-100页 |
| 5.3.1 不同激素及灰霉菌处理后‘商-24’中VqAP13 基因的表达分析 | 第83页 |
| 5.3.2 VqAP13 基因的克隆与序列分析 | 第83-86页 |
| 5.3.3 拟南芥转基因株系的检测 | 第86-87页 |
| 5.3.4 过量表达VqAP13 的转基因拟南芥对白粉病的响应 | 第87-89页 |
| 5.3.5 VqAP13 过量表达增强转基因拟南芥对PstDC3000 的抗性 | 第89-91页 |
| 5.3.6 Pst DC3000 侵染后 VqAP13 转基因拟南芥株系中抗病相关基因的表达分析 | 第91-92页 |
| 5.3.7 不同物质处理后 Vq AP13 转基因拟南芥株系中胼胝质的积累 | 第92-93页 |
| 5.3.8 灰霉菌侵染对转基因拟南芥株系中VqAP13 表达量的影响 | 第93-94页 |
| 5.3.9 VqAP13 过量表达降低转基因拟南芥对灰霉病的抗性 | 第94-98页 |
| 5.3.10 灰霉病侵染后VqAP13 转基因拟南芥中抗病相关基因的表达分析 | 第98页 |
| 5.3.11 中国野生毛葡萄‘商-24’VqAP13 启动子的克隆与序列分析 | 第98页 |
| 5.3.12 中国野生毛葡萄‘商-24’VqAP13 启动子的活性分析 | 第98-100页 |
| 5.4 讨论 | 第100-103页 |
| 第六章 结论 | 第103-104页 |
| 参考文献 | 第104-118页 |
| 附录 | 第118-121页 |
| 缩略词 | 第121-122页 |
| 致谢 | 第122-123页 |
| 作者简介 | 第123-124页 |
