| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 绪论 | 第8-17页 |
| 1.1 人血清白蛋白-粒细胞集落刺激因子融合蛋白概述 | 第8-9页 |
| 1.1.1 粒细胞集落刺激因子简介 | 第8页 |
| 1.1.2 研究进展 | 第8页 |
| 1.1.3 融合蛋白简介 | 第8-9页 |
| 1.2 毕赤酵母表达系统概述 | 第9-10页 |
| 1.3 毕赤酵母诱导期优化控制策略 | 第10-12页 |
| 1.3.1 供氧条件的优化与控制 | 第10-11页 |
| 1.3.2 甲醇浓度的优化与控制 | 第11-12页 |
| 1.3.3 混合碳源流加诱导策略 | 第12页 |
| 1.4 转录组学概述 | 第12-15页 |
| 1.4.1 基因芯片技术 | 第13-14页 |
| 1.4.2 基因表达系列分析技术 | 第14页 |
| 1.4.3 RNA测序技术 | 第14-15页 |
| 1.5 论文立题意义及主要内容 | 第15-17页 |
| 1.5.1 本论文立题意义 | 第15-16页 |
| 1.5.2 本论文主要内容 | 第16-17页 |
| 第二章 材料与方法 | 第17-22页 |
| 2.1 实验仪器与设备 | 第17页 |
| 2.2 实验菌株 | 第17-18页 |
| 2.3 培养基 | 第18页 |
| 2.4 发酵培养方法 | 第18-19页 |
| 2.4.1 种子培养方法 | 第18页 |
| 2.4.2 分批补料法培养毕赤酵母表达HSA-GCSF~m | 第18-19页 |
| 2.5 分析方法 | 第19-20页 |
| 2.5.1 细胞浓度及干重测定 | 第19页 |
| 2.5.2 甲醇浓度测定 | 第19页 |
| 2.5.3 乙醇浓度测定 | 第19页 |
| 2.5.4 山梨醇浓度测定 | 第19页 |
| 2.5.5 O_2利用速率，CO_2释放速率的计算 | 第19页 |
| 2.5.6 HSA-GCSF~m含量的测定 | 第19页 |
| 2.5.7 总蛋白浓度测定 | 第19页 |
| 2.5.8 酶活力测定 | 第19-20页 |
| 2.6 基于RNAseq技术的转录组学分析 | 第20-22页 |
| 2.6.1 建库测序 | 第20-21页 |
| 2.6.2 基因表达水平分析 | 第21页 |
| 2.6.3 差异基因筛选 | 第21-22页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第22-38页 |
| 3.1 不同甲醇/山梨醇共混流加条件下的发酵性能比较 | 第22-27页 |
| 3.1.1 不同甲醇/山梨醇共混流加策略的控制性能 | 第22-23页 |
| 3.1.2 不同甲醇/山梨醇共混流加策略下的蛋白表达性能 | 第23-24页 |
| 3.1.3 不同甲醇/山梨醇共混流加策略下的呼吸特征差异 | 第24-25页 |
| 3.1.4 不同甲醇/山梨醇共混流加策略下的碳代谢关键酶活性 | 第25-27页 |
| 3.2 转录组学分析质量评估 | 第27-28页 |
| 3.2.1 RNA测序错误率分布 | 第27页 |
| 3.2.2 RNA测序数据质量控制 | 第27-28页 |
| 3.2.3 RNA-Seq相关性检查 | 第28页 |
| 3.3 不同诱导策略下基因的差异表达分析 | 第28-31页 |
| 3.3.1 差异化表达基因的筛选 | 第28-29页 |
| 3.3.2 DEGs的GO功能富集分析 | 第29-30页 |
| 3.3.3 DEGs的KEGG Pathway代谢途径分析 | 第30-31页 |
| 3.4 不同诱导策略影响HSA-GCSF~m表达的转录组学机理 | 第31-35页 |
| 3.4.1 甲醇代谢相关基因转录水平变化 | 第31-32页 |
| 3.4.2 山梨醇代谢相关基因转录水平变化 | 第32-33页 |
| 3.4.3 蛋白酶体代谢相关基因转录水平变化 | 第33-34页 |
| 3.4.4 过氧化物代谢相关基因转录水平变化 | 第34页 |
| 3.4.5 氨基酸代谢相关基因转录水平变化 | 第34-35页 |
| 3.5 Mut~+型毕赤酵母的碳源（甲醇和山梨醇）消耗特性 | 第35-38页 |
| 3.5.1 山梨醇浓度恒定条件下Mut~+型毕赤酵母的碳源消耗特性 | 第35-38页 |
| 主要结论与展望 | 第38-40页 |
| 主要结论 | 第38-39页 |
| 展望 | 第39-40页 |
| 致谢 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-46页 |
| 附录 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第46页 |
| 一、作者申请学位的论文或科研成果 | 第46页 |
| 二、作者其他论文或科研成果 | 第46页 |
