| 摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 符号缩写 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-29页 |
| 1.1 禽呼肠孤病毒的研究进展 | 第12-14页 |
| 1.2 禽呼肠孤病毒的病原学 | 第14-16页 |
| 1.3 禽呼肠孤病毒的流行病学 | 第16-17页 |
| 1.4 禽呼肠孤病毒的基因组学 | 第17-18页 |
| 1.5 各基因节段编码的蛋白 | 第18-22页 |
| 1.6 酵母双杂交系统简介 | 第22-26页 |
| 1.6.1 酵母双杂交的原理 | 第22-23页 |
| 1.6.2 酵母双杂交的优缺点 | 第23-25页 |
| 1.6.3 酵母双杂交技术的发展 | 第25-26页 |
| 1.7 本研究的内容、目的与意义 | 第26-28页 |
| 1.7.1 研究内容 | 第26-27页 |
| 1.7.2 目的与意义 | 第27-28页 |
| 技术路线 | 第28-29页 |
| 第二章 pGBKT7-σA重组质粒的构建及其鉴定 | 第29-47页 |
| 2.1 试验材料与仪器 | 第29-31页 |
| 2.1.1 实验试剂 | 第29-30页 |
| 2.1.2 主要实验仪器 | 第30页 |
| 2.1.3 主要实验试剂的配制 | 第30-31页 |
| 2.2 实验方法 | 第31-42页 |
| 2.2.1 诱饵质粒的构建 | 第31-39页 |
| 2.2.2 pGBKT7-σA重组诱饵质粒的自激活效应检测 | 第39-41页 |
| 2.2.3 pGBKT7-σA重组诱饵质粒的毒性效应检测 | 第41-42页 |
| 2.3 实验结果 | 第42-46页 |
| 2.3.1 重组诱饵质粒的构建 | 第42-44页 |
| 2.3.2 重组质粒pGBKT7-σA的自激活效应检测 | 第44-45页 |
| 2.3.3 重组诱饵质粒pGBKT7-σA的毒性效应效应检测 | 第45-46页 |
| 2.4 讨论 | 第46-47页 |
| 第三章 SPF鸡肝组织细胞cDNA文库的构建及其鉴定 | 第47-61页 |
| 3.1 实验材料与仪器 | 第48-49页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第48页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第48页 |
| 3.1.3 主要实验仪器 | 第48-49页 |
| 3.1.4 主要实验试剂的配制 | 第49页 |
| 3.2 实验方法 | 第49-55页 |
| 3.2.1 SPF鸡肝组织细胞的获得 | 第49-50页 |
| 3.2.2 SPF鸡肝组织cDNA的合成与纯化 | 第50-52页 |
| 3.2.3 cDNA文库的制备 | 第52-54页 |
| 3.2.4 SPF鸡肝组织细胞cDNA文库的质量检测 | 第54-55页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第55-59页 |
| 3.3.1 SPF鸡肝组织细胞总RNA的抽提 | 第55-56页 |
| 3.3.2 扩增双链的电泳检测 | 第56-57页 |
| 3.3.3 cDNA的纯化 | 第57页 |
| 3.3.4 文库容量及其多态性分析 | 第57-58页 |
| 3.3.5 序列测定以及分子生物学分析 | 第58-59页 |
| 3.4 讨论 | 第59-61页 |
| 第四章 利用酵母双杂交技术筛选与禽呼肠孤病毒σA相互作用的宿主蛋白 | 第61-78页 |
| 4.1 实验材料与仪器 | 第61-63页 |
| 4.1.1 实验试剂 | 第61-62页 |
| 4.1.2 主要实验仪器 | 第62-63页 |
| 4.2 实验方法 | 第63-68页 |
| 4.2.1 酵母双杂交对照实验 | 第63-64页 |
| 4.2.2 重组诱饵质粒与文库酵母双杂交筛选 | 第64-66页 |
| 4.2.3 阳性克隆的鉴定 | 第66-68页 |
| 4.2.4 杂交效率与筛选到的克隆数 | 第68页 |
| 4.2.5 候选蛋白的生物信息学分析 | 第68页 |
| 4.3 实验结果 | 第68-76页 |
| 4.3.1 酵母双杂交对照实验 | 第68-71页 |
| 4.3.2 重组诱饵质粒pGBKT7-σA与SPF鸡肝组织细胞cDNA文库的酵母双杂交筛选 | 第71-72页 |
| 4.3.3 酵母双杂交的杂交效率和筛选到的克隆数 | 第72-73页 |
| 4.3.4 阳性克隆的鉴定 | 第73页 |
| 4.3.5 互作蛋白的生物信息学分析 | 第73-76页 |
| 4.4 讨论 | 第76-78页 |
| 第五章 11种候选互作蛋白的初步验证 | 第78-83页 |
| 5.1 实验材料与仪器 | 第78-80页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第78-79页 |
| 5.2.2 主要实验仪器 | 第79-80页 |
| 5.2 实验方法 | 第80页 |
| 5.2.1 回复杂交验证 | 第80页 |
| 5.2.2 β-半乳糖苷酶验证 | 第80页 |
| 5.3 实验结果 | 第80-82页 |
| 5.4 讨论 | 第82-83页 |
| 第六章 结论 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第93页 |
