| 符号说明 | 第5-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第14-25页 |
| 1.1 禽流感病毒的概述 | 第14-18页 |
| 1.1.1 流感病毒的基因组成 | 第15页 |
| 1.1.2 NP蛋白的结构与功能 | 第15-16页 |
| 1.1.3 M蛋白的结构与功能 | 第16-17页 |
| 1.1.4 禽流感病毒T细胞表位的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.2 禽流感疫苗的研究与进展 | 第18-22页 |
| 1.2.1 灭活苗 | 第18-19页 |
| 1.2.2 核酸疫苗 | 第19页 |
| 1.2.3 表位疫苗、亚单位疫苗 | 第19-22页 |
| 1.3 细胞毒性T淋巴细胞表位的研究方法 | 第22-23页 |
| 1.3.1 结合基序法 | 第22页 |
| 1.3.2 矩阵法 | 第22-23页 |
| 1.3.3 基于结构的表位预测 | 第23页 |
| 1.4 T细胞表位活性的检测方法 | 第23-25页 |
| 1.4.1 ~(51)Cr释放试验 | 第23页 |
| 1.4.2 MHC肽四聚体技术 | 第23-24页 |
| 1.4.3 T淋巴细胞增殖试验 | 第24页 |
| 1.4.4 胞内细胞因子染色法 | 第24页 |
| 1.4.5 本研究使用的预测方法 | 第24-25页 |
| 1.5 研究的目的和意义 | 第25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-40页 |
| 2.1 材料 | 第25-28页 |
| 2.1.1 毒株 | 第25页 |
| 2.1.2 引物、菌种、质粒、细胞 | 第25-26页 |
| 2.1.3 SPF鸡胚和SPF鸡 | 第26页 |
| 2.1.4 四种多肽序列 | 第26页 |
| 2.1.5 主要试验试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.6 主要试验仪器 | 第27页 |
| 2.1.7 主要试剂配制 | 第27-28页 |
| 2.2 方法 | 第28-40页 |
| 2.2.1 重组质粒pCAGGS-NP构建 | 第28-32页 |
| 2.2.2 间接免疫荧光（IFA）检测NP蛋白的瞬时表达 | 第32-33页 |
| 2.2.3 Western blot检测NP蛋白瞬时的表达 | 第33-34页 |
| 2.2.4 间接ELISA方法的建立 | 第34-35页 |
| 2.2.5 免疫用质粒的大量制备以及免疫后抗体的检测 | 第35-36页 |
| 2.2.6 MHC限制性T细胞表位的鉴定 | 第36-38页 |
| 2.2.7 NP蛋白T细胞表位NP_(67-74)与 4M2e-MAP合成肽联合免疫的初步研究 | 第38-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-51页 |
| 3.1 pCAGGS –NP重组质粒的构建 | 第40-44页 |
| 3.1.1 PCR及酶切鉴定结果 | 第40-42页 |
| 3.1.2 间接免疫荧光和Western-blot检测NP蛋白的瞬时表达 | 第42-43页 |
| 3.1.3 间接ELISA检测方法的建立及抗体的检测 | 第43-44页 |
| 3.2 NP蛋白MHC限制性CTL表位的鉴定 | 第44-49页 |
| 3.2.1 Q-PCR检测IFN-γ 基因的表达量 | 第44-46页 |
| 3.2.2 ELISA检测IFN-γ 的分泌量 | 第46-48页 |
| 3.2.3 CD8+T细胞的增殖试验检测结果 | 第48-49页 |
| 3.3 NP蛋白T细胞表位的应用 | 第49-51页 |
| 3.3.1 攻毒后小鼠体重变化结果 | 第49页 |
| 3.3.2 肺脏病理组织变化结果 | 第49-50页 |
| 3.3.3 Q-PCR检测肺脏病毒含量的结果 | 第50-51页 |
| 4 讨论 | 第51-55页 |
| 4.1 禽流感NP蛋白T细胞表位的鉴定 | 第51-53页 |
| 4.2 NP蛋白T细胞表位NP67-74与 4M2e-MAP合成肽联合免疫的初步研究 | 第53-55页 |
| 5 结论 | 第55-56页 |
| 6 参考文献 | 第56-68页 |
| 7 致谢 | 第68-69页 |
| 8 攻读学位期间发表论文情况 | 第69页 |
