| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 第一章 引言 | 第19-33页 |
| 1.1 苹果采后青霉病 | 第19-22页 |
| 1.1.1 青霉病是苹果采后常发的真菌性病害 | 第19页 |
| 1.1.2 P.expansum的致病力 | 第19-20页 |
| 1.1.3 P.expansum的产毒特性 | 第20页 |
| 1.1.4 展青霉素 | 第20-22页 |
| 1.2 苹果采后青霉病的防治方法 | 第22-24页 |
| 1.2.1 增强苹果抗病性 | 第22-23页 |
| 1.2.2 抑制P.expansum活性 | 第23-24页 |
| 1.3 解淀粉芽孢杆菌在防治果蔬采后病害中的应用及存在的问题 | 第24-27页 |
| 1.3.1 解淀粉芽孢杆菌在防治果蔬采后病害中的应用 | 第24页 |
| 1.3.2 脂肽类抗生素 | 第24-26页 |
| 1.3.3 解淀粉芽孢杆菌在防治果蔬采后病害中存在的问题 | 第26-27页 |
| 1.4 苹果的采后生理及防腐保鲜技术 | 第27-29页 |
| 1.4.1 苹果采后生理 | 第27-28页 |
| 1.4.2 苹果采后的常用防腐保鲜技术 | 第28-29页 |
| 1.5 课题研究意义、内容及技术路线 | 第29-33页 |
| 1.5.1 课题研究意义 | 第29-30页 |
| 1.5.2 课题研究内容 | 第30-32页 |
| 1.5.3 技术路线 | 第32-33页 |
| 第二章 P.expansum高效拮抗菌株的分离、鉴定及诱变选育 | 第33-45页 |
| 2.1 引言 | 第33页 |
| 2.2 实验材料 | 第33-34页 |
| 2.2.1 菌种与试剂 | 第33页 |
| 2.2.2 器械 | 第33-34页 |
| 2.2.3 培养基 | 第34页 |
| 2.3 实验方法 | 第34-37页 |
| 2.3.1 细菌的分离 | 第34页 |
| 2.3.2 初筛 | 第34页 |
| 2.3.3 复筛 | 第34页 |
| 2.3.4 菌株的形态学与生理生化鉴定 | 第34-35页 |
| 2.3.5 16S rDNA基因序列分析 | 第35页 |
| 2.3.6 高效拮抗菌的低能N~+注入诱变选育 | 第35-36页 |
| 2.3.7 突变株的菌悬液浓度与A_(600)值测定 | 第36页 |
| 2.3.8 突变株菌悬液及无细胞发酵液对展青霉素的去除 | 第36-37页 |
| 2.3.9 数据处理 | 第37页 |
| 2.4 结果与分析 | 第37-42页 |
| 2.4.1 P.expansum拮抗菌株的分离和筛选 | 第37-38页 |
| 2.4.2 P.expansum拮抗菌株的形态学与生理生化鉴定 | 第38页 |
| 2.4.3 16S rDNA基因序列分析 | 第38-39页 |
| 2.4.4 离子注入诱变结果 | 第39-41页 |
| 2.4.5 B.amyloliquefaciensBA-16-8菌悬液平板菌落计数浓度与A_(600)值的关系 | 第41页 |
| 2.4.6 BA-16-8菌悬液及其无细胞发酵液对展青霉素的去除 | 第41-42页 |
| 2.5 结论与讨论 | 第42-45页 |
| 第三章 B.amyloliquefaciens BA-16-8抗菌物质的性质研究 | 第45-53页 |
| 3.1 引言 | 第45页 |
| 3.2 实验材料 | 第45-46页 |
| 3.2.1 供试菌株 | 第45页 |
| 3.2.2 培养基 | 第45-46页 |
| 3.2.3 仪器 | 第46页 |
| 3.3 实验方法 | 第46-48页 |
| 3.3.1 B.amyloliquefaciens BA-16-8抗菌物质的活性检测 | 第46页 |
| 3.3.2 B.amyloliquefaciens BA-16-8无细胞发酵液的制备 | 第46页 |
| 3.3.3 B.amyloliquefaciens BA-16-8无细胞发酵液对P.expansum生物活性的影响 | 第46-47页 |
| 3.3.4 B.amyloliquefaciens BA-16-8无细胞发酵液抑菌物质的初步确定 | 第47页 |
| 3.3.5 菌株无细胞发酵液抑菌物质的特性研究 | 第47页 |
| 3.3.6 抗菌谱的测定 | 第47-48页 |
| 3.3.7 菌株BA-16-8无细胞发酵液表面活性特征鉴定 | 第48页 |
| 3.3.8 数据分析 | 第48页 |
| 3.4 结果与分析 | 第48-52页 |
| 3.4.1 菌株BA-16-8不同生长时期发酵液的抗真菌性分析 | 第48-49页 |
| 3.4.2 菌株BA-16-8无细胞发酵液对P.expansum孢子萌发的抑制 | 第49页 |
| 3.4.3 菌株无细胞发酵液的抑菌谱 | 第49-50页 |
| 3.4.4 B.amyloliquefaciens BA-16-8无细胞发酵液抑菌物质的初步鉴定 | 第50页 |
| 3.4.5 B.amyloliquefaciensBA-16-8无细胞发酵液抑菌活性稳定性分析 | 第50-52页 |
| 3.4.6 菌株BA-16-8无细胞发酵液的表面活性特征 | 第52页 |
| 3.5 结论与讨论 | 第52-53页 |
| 第四章 B.amyloliquefaciens BA-16-8的脂肽类抗生素基因检测及所产脂肽的纯化与鉴定 | 第53-61页 |
| 4.1 引言 | 第53页 |
| 4.2 实验材料 | 第53-54页 |
| 4.2.1 菌株 | 第53页 |
| 4.2.2 仪器 | 第53页 |
| 4.2.3 培养基 | 第53-54页 |
| 4.2.4 标准品 | 第54页 |
| 4.3 实验方法 | 第54-56页 |
| 4.3.1 脂肽类抗生素合成酶相关基因的克隆 | 第54页 |
| 4.3.2 菌株BA-16-8代谢产物蛋白粗提液的制备 | 第54-55页 |
| 4.3.3 脂肽类抗生素的分离、纯化和鉴定 | 第55-56页 |
| 4.4 结果与分析 | 第56-59页 |
| 4.4.1 脂肽类抗生素合成相关基因序列分析 | 第56页 |
| 4.4.2 HPLC分析 | 第56-58页 |
| 4.4.3 HPLC分离纯化蛋白抗P.expansum效果评价 | 第58页 |
| 4.4.4 MALD-TOF-MS鉴定 | 第58-59页 |
| 4.5 结论与讨论 | 第59-61页 |
| 第五章 B.amyloliquefaciensBA-16-8防治P.expansum的主要抑菌物质确定 | 第61-73页 |
| 5.1 引言 | 第61页 |
| 5.2 实验材料 | 第61-63页 |
| 5.2.1 菌株与质粒 | 第61-62页 |
| 5.2.2 主要试剂与仪器 | 第62页 |
| 5.2.3 引物 | 第62页 |
| 5.2.4 培养基 | 第62-63页 |
| 5.3 实验方法 | 第63-66页 |
| 5.3.1 解淀粉芽孢杆菌fengycin基因的生物信息学分析 | 第63页 |
| 5.3.2 穿梭质粒pMAD构建缺失突变株BA-16-8△fen | 第63-64页 |
| 5.3.3 野生株BA-16-8和突变株BA-16-8△fen的HPLC分析 | 第64-65页 |
| 5.3.4 野生株BA-16-8和突变株BA-16-8△fen对P.expansum的抑菌活性检测 | 第65页 |
| 5.3.5 P.expansum孢子液的制备 | 第65页 |
| 5.3.6 野生株BA-16-8和突变株BA-16-8△fen对苹果青霉病的防效测定 | 第65-66页 |
| 5.4 结果与分析 | 第66-71页 |
| 5.4.1 B.amyloliquefaciens的fengycin合成酶生物信息学分析 | 第66页 |
| 5.4.2 B.amyloliquefaciensBA-16-8 fenC基因缺失突变株的构建筛选 | 第66-67页 |
| 5.4.3 B.amyloliquefaciensBA-16-8野生株及突变株的HPLC分析结果 | 第67-68页 |
| 5.4.4 B.amyloliquefaciensBA-16-8野生株及突变株脂肽类产物质谱分析结果 | 第68-70页 |
| 5.4.5 野生株BA-16-8和突变株BA-16-8△fen对P.expansum的抑菌活性分析 | 第70页 |
| 5.4.6 野生株BA-16-8和突变株BA-16-8△fen对苹果青霉病的防效测定 | 第70-71页 |
| 5.5 结论与讨论 | 第71-73页 |
| 第六章 Fengycin对P.expansum细胞的抑制作用研究 | 第73-83页 |
| 6.1 引言 | 第73页 |
| 6.2 实验材料 | 第73-74页 |
| 6.2.1 菌株 | 第73-74页 |
| 6.2.2 试剂和仪器 | 第74页 |
| 6.3 实验方法 | 第74-76页 |
| 6.3.1 脂肽fengycin的制备 | 第74页 |
| 6.3.2 P.expansum的生长曲线的绘制 | 第74页 |
| 6.3.3 Fengycin对P.expansum生长的影响 | 第74-75页 |
| 6.3.4 Fengycin对P.expansum菌丝体细胞结构的影响 | 第75页 |
| 6.3.5 Fengycin对Pexpansum细胞膜通透性影响 | 第75页 |
| 6.3.6 凝胶阻滞实验检测fengycin对P.expansum细胞核DNA的影响 | 第75-76页 |
| 6.4 结果与分析 | 第76-81页 |
| 6.4.1 P.expansum的生长规律 | 第76页 |
| 6.4.2 Fengycin对P.expansum的生长抑制效果 | 第76页 |
| 6.4.3 Fengycin对P.expansum菌丝体形态结构的影响 | 第76-78页 |
| 6.4.4 Fengycin对P.expansum菌丝体细胞膜通透性的影响 | 第78-79页 |
| 6.4.5 Fengycin对P.expansumDNA的影响 | 第79-81页 |
| 6.5 结论与讨论 | 第81-83页 |
| 第七章 Fengycin对P.expansum呼吸及代谢的抑制作用研究 | 第83-91页 |
| 7.1 引言 | 第83页 |
| 7.2 实验与材料 | 第83-84页 |
| 7.2.1 菌株 | 第83页 |
| 7.2.2 试剂 | 第83-84页 |
| 7.3 实验方法 | 第84-86页 |
| 7.3.1 BA-16-8菌株发酵液及fengycin的制备 | 第84页 |
| 7.3.2 P.expansum孢子液的制备 | 第84页 |
| 7.3.3 Fengycin对P.expansum呼吸代谢抑制作用的研究 | 第84-85页 |
| 7.3.4 P.expansum菌丝体培养 | 第85页 |
| 7.3.5 线粒体的制备 | 第85页 |
| 7.3.6 Fengycin对离体条件下P.expansum线粒体复合酶的活力测定 | 第85-86页 |
| 7.3.7 Fengycin对活体条件下P.expansum线粒体复合酶的活力测定 | 第86页 |
| 7.3.8 Fengycin对P.expansum物质代谢的影响 | 第86页 |
| 7.4 结果与分析 | 第86-89页 |
| 7.4.1 Fengycin对P expansum的呼吸代谢的影响 | 第86-87页 |
| 7.4.2 Fengycin对离体条件下P.expansum线粒体复合酶活性的影响 | 第87-88页 |
| 7.4.3 不同浓度fengycin处理下P.expansum的营养利用率 | 第88-89页 |
| 7.5 结论与讨论 | 第89-91页 |
| 第八章 Fengycin抑制P.expansum产展青霉素的机制研究 | 第91-101页 |
| 8.1 引言 | 第91页 |
| 8.2 实验材料 | 第91-92页 |
| 8.2.1 试剂及仪器 | 第91-92页 |
| 8.2.2 培养基 | 第92页 |
| 8.3 实验方法 | 第92-95页 |
| 8.3.1 P.expansum的培养与预处理 | 第92页 |
| 8.3.2 P.expansum单位质量菌丝体产展青霉素的检测 | 第92页 |
| 8.3.3 P.expansum RNA提取 | 第92-93页 |
| 8.3.4 反转录PCR | 第93页 |
| 8.3.5 SYBR Green I real time PCR | 第93-94页 |
| 8.3.6 18SrRNA标准曲线的建立 | 第94页 |
| 8.3.7 数据处理 | 第94-95页 |
| 8.4 结果与分析 | 第95-99页 |
| 8.4.1 Fengycin对展青霉素产生的影响 | 第95-96页 |
| 8.4.2 Fengycin对Pexpansum 6-MSAS和IDH基因转录产生的影响 | 第96-99页 |
| 8.5 结论与讨论 | 第99-101页 |
| 第九章 B.amyloliquefaciens BA-16-8的安全性评价 | 第101-107页 |
| 9.1 引言 | 第101页 |
| 9.2 实验材料 | 第101-102页 |
| 9.2.1 拮抗菌 | 第101页 |
| 9.2.2 实验动物 | 第101页 |
| 9.2.3 试剂与仪器 | 第101-102页 |
| 9.3 实验方法 | 第102-103页 |
| 9.3.1 拮抗菌菌悬液的制备 | 第102页 |
| 9.3.2 拮抗菌发酵液的急性经口毒性实验 | 第102页 |
| 9.3.3 28d喂养实验 | 第102-103页 |
| 9.3.4 数据处理与分析 | 第103页 |
| 9.4 结果与分析 | 第103-106页 |
| 9.4.1 急性经口毒性实验 | 第103页 |
| 9.4.2 28d喂养实验 | 第103页 |
| 9.4.3 血常规指标测定结果 | 第103-105页 |
| 9.4.4 生理生化指标测定结果 | 第105-106页 |
| 9.4.5 脏器指数测定结果 | 第106页 |
| 9.5 结论与讨论 | 第106-107页 |
| 第十章 壳聚糖复合B.amyloliquefaciens BA-16-8对P.expansum生长的抑制效果研究 | 第107-117页 |
| 10.1 引言 | 第107-108页 |
| 10.2 实验材料 | 第108页 |
| 10.2.1 菌株 | 第108页 |
| 10.2.2 试剂 | 第108页 |
| 10.2.3 水果 | 第108页 |
| 10.2.4 培养基 | 第108页 |
| 10.3 实验方法 | 第108-110页 |
| 10.3.1 P.expansum孢子液的制备 | 第108页 |
| 10.3.2 B.amyloliquefaciensBA-16-8菌悬液及无细胞发酵液的制备 | 第108页 |
| 10.3.3 壳聚糖对P.expansum孢子萌发的抑制研究 | 第108-109页 |
| 10.3.4 B.amyloliquefaciensBA-16-8对P.expansum孢子萌发的抑制研究 | 第109页 |
| 10.3.5 壳聚糖处理对苹果青霉病的防效测定 | 第109页 |
| 10.3.6 B.amyloliquefaciens BA-16-8对苹果青霉病的防效测定 | 第109-110页 |
| 10.3.7 壳聚糖对B.amyloliquefaciensBA-16-8生长的影响 | 第110页 |
| 10.3.8 壳聚糖与B.amyloliquefaciens BA-16-8联合使用对苹果青霉病的防效测定 | 第110页 |
| 10.4 结果与分析 | 第110-115页 |
| 10.4.1 壳聚糖对P.expansum孢子萌发的抑制效果 | 第110-111页 |
| 10.4.2 B.amyloliquefaciens BA-16-8对P.expansum孢子萌发的抑制效果 | 第111-112页 |
| 10.4.3 壳聚糖对苹果青霉病的防治效果 | 第112-113页 |
| 10.4.4 B.amyloliquefaciens BA-16-8对苹果青霉病的防治效果 | 第113-114页 |
| 10.4.5 壳聚糖对B. amyloliquefaciensBA-16-8生长的影响 | 第114页 |
| 10.4.6 B.amyloliquefaciensBA-16-8与壳聚糖联合处理对苹果青霉病的防治效果 | 第114-115页 |
| 10.5 结论与讨论 | 第115-117页 |
| 第十一章 苹果保鲜液的制备及其对苹果贮藏期多酚含量的影响 | 第117-127页 |
| 11.1 引言 | 第117页 |
| 11.2 实验材料 | 第117-118页 |
| 11.2.1 供试材料 | 第117页 |
| 11.2.2 供试药剂及仪器 | 第117-118页 |
| 11.3 实验方法 | 第118-120页 |
| 11.3.1 样品制备 | 第118页 |
| 11.3.2 苹果多酚提取纯化工艺 | 第118-120页 |
| 11.3.3 各处理对苹果在贮藏期间的多酚含量测定 | 第120页 |
| 11.4 结果与分析 | 第120-125页 |
| 11.4.1 苹果多酚提取纯化工艺 | 第120-125页 |
| 11.4.2 各处理对苹果在贮藏期间的总多酚含量测定 | 第125页 |
| 11.5 结论与讨论 | 第125-127页 |
| 第十二章 生物活性膜的制备及苹果采后的防腐保鲜研究 | 第127-139页 |
| 12.1 引言 | 第127-128页 |
| 12.2 实验材料 | 第128-129页 |
| 12.2.1 供试菌株 | 第128页 |
| 12.2.2 药剂及仪器 | 第128页 |
| 12.2.3 供试材料 | 第128-129页 |
| 12.3 实验方法 | 第129-130页 |
| 12.3.1 防腐液的制备 | 第129页 |
| 12.3.2 保鲜液的制备 | 第129页 |
| 12.3.3 水果处理 | 第129页 |
| 12.3.4 各项指标测定 | 第129-130页 |
| 12.4 结果与分析 | 第130-137页 |
| 12.4.1 各处理对苹果腐烂率的影响 | 第130-131页 |
| 12.4.2 各处理对苹果硬度的影响 | 第131页 |
| 12.4.3 各处理对苹果失重率的影响 | 第131-132页 |
| 12.4.4 各处理对苹果营养成分的影响 | 第132-134页 |
| 12.4.5 各处理对苹果丙二醛(MDA)含量的影响 | 第134-135页 |
| 12.4.6 各处理对苹果衰老相关酶类的影响 | 第135-137页 |
| 12.5 结论与讨论 | 第137-139页 |
| 结论与创新点 | 第139-143页 |
| 1. 全文总结 | 第139-141页 |
| 2. 创新点 | 第141-142页 |
| 3. 下一步拟开展的工作 | 第142-143页 |
| 参考文献 | 第143-163页 |
| 攻读博士学位期间取得的科研成果 | 第163-165页 |
| 致谢 | 第165-166页 |
| 作者简介 | 第166页 |
