| 摘要 | 第7-8页 |
| 前言 | 第8-18页 |
| 1 试验材料 | 第18-20页 |
| 1.1 试验动物 | 第18页 |
| 1.2 主要仪器及设备 | 第18-19页 |
| 1.3 主要试验试剂与耗材 | 第19-20页 |
| 1.4 主要试剂的配制 | 第20页 |
| 2 试验方法 | 第20-28页 |
| 2.1 病毒的增殖培养 | 第20-21页 |
| 2.2 实验动物攻毒 | 第21页 |
| 2.3 病理切片的制备 | 第21-22页 |
| 2.3.1 肾脏组织的固定 | 第21页 |
| 2.3.2 肾脏组织脱水及透明 | 第21-22页 |
| 2.3.3 肾脏组织浸蜡与包埋 | 第22页 |
| 2.3.4 肾脏组织石蜡切片制备及HE染色 | 第22页 |
| 2.4 免疫组织化学 | 第22-23页 |
| 2.5 鸡血液淋巴细胞的总RNA提取 | 第23-24页 |
| 2.5.1 鸡血液淋巴细胞的分离 | 第23-24页 |
| 2.5.2 淋巴细胞总RNA提取 | 第24页 |
| 2.5.3 mRNA质量检验 | 第24页 |
| 2.6 反转录合成第一链cDNA | 第24-25页 |
| 2.7 病毒的检测 | 第25-26页 |
| 2.7.1 IBV引物的设计 | 第25页 |
| 2.7.2 PCR扩增 | 第25-26页 |
| 2.7.3 琼脂糖凝胶电泳检测 | 第26页 |
| 2.8 荧光定量PCR检测目的基因 | 第26-28页 |
| 2.8.1 引物的设计 | 第26-27页 |
| 2.8.2 引物鉴定 | 第27页 |
| 2.8.3 RT-PCR反应体系建立 | 第27-28页 |
| 3 试验结果 | 第28-38页 |
| 3.1 传染性支气管炎病毒(IBV)增殖 | 第28页 |
| 3.2 攻毒后雏鸡临床剖检病理变化 | 第28-30页 |
| 3.3 组织病理切片观察 | 第30-32页 |
| 3.4 免疫组化结果 | 第32页 |
| 3.5 血液淋巴细胞分离结果 | 第32-33页 |
| 3.6 血液淋巴细胞总mRNA质量鉴定 | 第33页 |
| 3.7 血液中IBV的检测 | 第33-34页 |
| 3.8 目的基因引物的鉴定 | 第34-38页 |
| 3.8.1 Real Time-PCR | 第35-37页 |
| 3.8.2 细胞因子的相对表达量变化 | 第37-38页 |
| 4 分析与讨论 | 第38-40页 |
| 4.1 本试验选取试验动物的的依据 | 第38页 |
| 4.2 组织病理学分析 | 第38页 |
| 4.3 石蜡切片对肾脏病理损伤呈现 | 第38-39页 |
| 4.4 免疫组化对病原侵袭部位的定位 | 第39页 |
| 4.5 RT-PC民护增验证目的基因 | 第39页 |
| 4.6 实时荧光定量PCR检测IFN-Y,IL-10,IL-12,IL-4相对表达量的变化 | 第39页 |
| 4.7 抗炎细胞因子相对表达量分析 | 第39-40页 |
| 5 结论 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-45页 |
| Abstract | 第45-46页 |
| 致谢 | 第47页 |