| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-12页 |
| 缩写词表 | 第12-13页 |
| 第一章 课题提出与前人研究进展 | 第13-22页 |
| 1 课题提出 | 第13-14页 |
| 2 VIGS的研究进展 | 第14-18页 |
| ·VIGS的发现 | 第14页 |
| ·VIGS的作用机制 | 第14-16页 |
| ·起始阶段 | 第14-15页 |
| ·维持阶段 | 第15页 |
| ·信号放大与传播 | 第15-16页 |
| ·VIGS载体 | 第16-17页 |
| ·VIGS在植物基因功能研究上的应用 | 第17-18页 |
| 3 植物转录因子概念及分类 | 第18-20页 |
| ·MY-B转录因子的结构特征 | 第18-19页 |
| ·FaMYB5转录因子的发现 | 第19页 |
| ·FaMYB5的功能研究 | 第19-20页 |
| 4 本课题的目标与意义 | 第20-22页 |
| 第二章 草莓FAMYB5基因的克隆序列分析及表达 | 第22-36页 |
| 1 材料与方法 | 第22-29页 |
| ·供试材料 | 第22-23页 |
| ·试剂和试剂盒 | 第23页 |
| ·工程菌株 | 第23页 |
| ·载体 | 第23-24页 |
| ·实验方法 | 第24-29页 |
| ·总RNA提取及检测 | 第24页 |
| ·cDNA合成 | 第24-25页 |
| ·引物的设计与片段扩增 | 第25-26页 |
| ·PCR产物回收 | 第26页 |
| ·感受态细胞制备 | 第26-27页 |
| ·产物与载体的连接、转化及测序后数据分析 | 第27页 |
| ·半定量RT-PCR检测基因表达水平 | 第27-28页 |
| ·qRT-PCR检测基因表达水平 | 第28-29页 |
| 2 结果与分析 | 第29-35页 |
| ·草莓6个不同发育时期总RNA的提取 | 第29-30页 |
| ·FaMYB5的全长编码区扩增和基因序列分析 | 第30-31页 |
| ·FaMYB5转录因子的结构分析 | 第31-34页 |
| ·FaMYB5功能相近转录因子的系统发育分析 | 第33页 |
| ·FaMYB5的三级结构预测 | 第33-34页 |
| ·FaMYB5基因在草莓果实发育过程中的表达 | 第34-35页 |
| 3 讨论 | 第35-36页 |
| 第三章 草莓果实VIGS体系的建立 | 第36-46页 |
| 1 材料与试剂 | 第36-38页 |
| ·材料 | 第36页 |
| ·菌株与质粒 | 第36-37页 |
| ·酶及试剂 | 第37-38页 |
| 2 方法 | 第38-42页 |
| ·FaMYB5基因特异性扩增及PCR产物回收 | 第38页 |
| ·酶切 | 第38页 |
| ·酶切产物及载体回收 | 第38-39页 |
| ·目的基因与载体连接 | 第39页 |
| ·大肠杆菌转化 | 第39页 |
| ·质粒提取及鉴定 | 第39-40页 |
| ·农杆菌感受态的制备 | 第40页 |
| ·转化农杆菌 | 第40页 |
| ·农杆菌侵染 | 第40-41页 |
| ·草莓中FaMYB5基因沉默分析 | 第41-42页 |
| ·病毒检测 | 第41页 |
| ·FaMYB5基因沉默的分子水平分析 | 第41-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-44页 |
| ·VIGS载体构建 | 第42页 |
| ·草莓VIGS体系的建立 | 第42-43页 |
| ·病毒的分子检测 | 第43页 |
| ·半定量和qRT-PCR技术对FaMYB5基因沉默效率的检测 | 第43-44页 |
| 4 讨论 | 第44-46页 |
| 第四章 FAMYB5基因沉默后类黄酮化合物代谢途径相关基因和花青素苷及原花青素的变化 | 第46-58页 |
| 1 材料与方法 | 第48-52页 |
| ·材料 | 第48页 |
| ·方法 | 第48-52页 |
| ·草莓FaMYB5沉默果实及阴性对照果实总RNA的提取 | 第48页 |
| ·类黄酮化合物代谢相关基因的引物设计与合成 | 第48-50页 |
| ·FaMYB5沉默后类黄酮代谢相关基因的半定量和qRT-PCR表达 | 第50-51页 |
| ·果实中花青素的提取和测定 | 第51页 |
| ·比色法测定FaMYB5沉默后草莓果实原花青素的总含量 | 第51-52页 |
| ·数据分析 | 第52页 |
| 2 结果与分析 | 第52-54页 |
| ·果实中FaMYB5基因沉默后类黄酮化合物代谢途径相关基因的变化 | 第52-53页 |
| ·果实中FaMYB5基因沉默后花青素的代谢变化 | 第53-54页 |
| ·果实中FaMYB5基因沉默后原花青素的代谢变化 | 第54页 |
| 3 讨论 | 第54-58页 |
| 第五章 需要进一步研究的内容 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-71页 |
| 附录 | 第71-74页 |
| 1、主要试剂配制 | 第71-73页 |
| 2、主要使用仪器 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
