| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 缩写说明 | 第9-15页 |
| 第一部分 文献综述 | 第15-29页 |
| 第一章 水稻白叶枯病研究进展 | 第15-18页 |
| 1. 水稻与Xoo互作 | 第15-16页 |
| 2. 植物抗性的分子机理 | 第16-18页 |
| ·病原相关分子模式(PAMP)介导的抗性 | 第16页 |
| ·无毒蛋白与抗性的关系 | 第16-17页 |
| ·抗病基因产物与无毒基因产物之间的作用 | 第17页 |
| ·植物抗病性应答 | 第17页 |
| ·诱导性抗病反应 | 第17-18页 |
| 第二章 植物miRNAs研究进展 | 第18-27页 |
| 1 植物miRNA的预测与鉴定 | 第18-19页 |
| 2 植物miRNA的生物合成 | 第19-20页 |
| 3 植物miRNA的作用机制 | 第20-21页 |
| 4 miRNA在植物发育中的作用 | 第21-22页 |
| 5 植物miRNA与逆境 | 第22-27页 |
| ·miRNA与干旱胁迫 | 第23页 |
| ·miRNA与盐胁迫 | 第23-24页 |
| ·miRNA与生物胁迫 | 第24-26页 |
| ·miRNA与其他逆境胁迫 | 第26-27页 |
| 第三章 本研究的目的和意义 | 第27-29页 |
| 1 研究目的和意义 | 第27-28页 |
| 2 技术路线 | 第28-29页 |
| 第二部分 研究论文 | 第29-66页 |
| 第一章 水稻白叶枯病抗病相关的miR1858a的表达分析 | 第29-37页 |
| 1 材料与方法 | 第29-32页 |
| ·试验材料 | 第29页 |
| ·试验方法 | 第29-32页 |
| ·材料培养及处理 | 第29-30页 |
| ·Trizol法提取水稻叶片总RNA | 第30页 |
| ·实时荧光定量PCR检测miR1858a的表达 | 第30-32页 |
| 2 结果分析 | 第32-35页 |
| ·miR1858a受Zhe173侵染后的表达分析 | 第32-33页 |
| ·抗性不同水稻基因型miR1858a对Zhe173的响应 | 第33-34页 |
| ·2个水稻基因型miR1858a响应不同白叶枯病小种的表达差异 | 第34-35页 |
| 3 讨论 | 第35-37页 |
| 第二章 非生物胁迫及激素处理下miR1858a的表达分析 | 第37-41页 |
| 1 材料与方法 | 第37页 |
| ·材料培养及处理 | 第37页 |
| ·Trizol法提取水稻叶片总RNA | 第37页 |
| ·实时荧光定量PCR检测miR1858a的表达 | 第37页 |
| 2 结果分析 | 第37-39页 |
| ·非生物胁迫下miR1858a的表达分析 | 第37-38页 |
| ·激素处理下miR1858a的表达分析 | 第38-39页 |
| 3 讨论 | 第39-41页 |
| 第三章 miR1858a靶基因的筛选与验证 | 第41-49页 |
| 1 材料与方法 | 第41-44页 |
| ·材料培养及处理 | 第41页 |
| ·Trizol法提取水稻叶片总RNA | 第41页 |
| ·实时荧光定量PCR检测部分预测miR1858a靶基因的表达 | 第41-43页 |
| ·RLM-5'RACE法对miR1858a候选靶基因剪切位点的验证 | 第43-44页 |
| ·Trizol法提取水稻叶片总RNA | 第43页 |
| ·mRNA的富集及RNA接头的连接 | 第43页 |
| ·二链的合成 | 第43页 |
| ·特异性巢式引物的设计及巢式PCR扩增 | 第43-44页 |
| ·PCR产物回收及序列测定 | 第44页 |
| 2 结果分析 | 第44-48页 |
| ·8个预测靶基因的实时荧光定量PCR | 第44-46页 |
| ·RLM-5'RACE对靶基因HIN1剪切位点的验证 | 第46-48页 |
| 3 讨论 | 第48-49页 |
| 第四章 载体的构建及水稻转基因遗传转化 | 第49-66页 |
| 1 材料与方法 | 第49-61页 |
| ·水稻受体品种与培养基 | 第49-50页 |
| ·试剂与菌株 | 第50页 |
| ·pre-miR1858a启动子载体的构建 | 第50-54页 |
| ·引物设计 | 第50页 |
| ·CTAB法提取水稻日本晴及SH5基因组DNA | 第50-51页 |
| ·PCR分别扩增日本晴及SH5中pre-miR1858a启动子序列 | 第51页 |
| ·PCR产物回收及序列测定 | 第51页 |
| ·质粒的提取 | 第51-52页 |
| ·目的片段与载体的双酶切及连接 | 第52页 |
| ·连接产物转化 | 第52页 |
| ·菌液PCR及测序验证 | 第52-54页 |
| ·pre-miR1858a过表达载体及STTM干扰载体的构建 | 第54-55页 |
| ·引物设计 | 第54页 |
| ·扩增pre-miR1858a序列和miR1858a成熟体STTM序列 | 第54页 |
| ·PCR产物回收及与T载体的连接 | 第54页 |
| ·连接产物转化 | 第54页 |
| ·菌液PCR及测序验证 | 第54页 |
| ·质粒的提取 | 第54-55页 |
| ·目的片段与载体的双酶切及连接 | 第55页 |
| ·连接产物转化 | 第55页 |
| ·菌液PCR及测序验证 | 第55页 |
| ·靶基因HIN1过表达载体的构建 | 第55-56页 |
| ·引物设计 | 第55页 |
| ·Trizol法提取水稻叶片总对RNA | 第55-56页 |
| ·cDNA一链的合成 | 第56页 |
| ·PCR扩增HIN1 cDNA全长ORF序列 | 第56页 |
| ·PCR产物回收及与T载体的连接 | 第56页 |
| I.5.6连接产物转化及测序验证 | 第56页 |
| ·质粒的提取、双酶切及与表达载体的连接 | 第56页 |
| ·连接产物转化及测序验证 | 第56页 |
| ·靶基因HIN1同义突变过表达载体的构建 | 第56-58页 |
| ·引物设计 | 第56页 |
| ·重叠PCR法定点突变HIN1基因 | 第56-57页 |
| ·PCR产物回收及与T载体的连接 | 第57页 |
| ·连接产物转化及测序验证 | 第57页 |
| ·质粒的提取、双酶切及与表达载体的连接 | 第57页 |
| ·连接产物转化及测序验证 | 第57页 |
| ·重组质粒的提取 | 第57-58页 |
| ·载体转化农杆菌 | 第58-59页 |
| ·农杆菌EHA105感受态细胞的制备 | 第58页 |
| ·农杆菌转化 | 第58页 |
| ·菌液PCR及测序验证 | 第58-59页 |
| ·水稻转基因遗传转化 | 第59-60页 |
| ·消毒 | 第59页 |
| ·诱导与继代培养 | 第59页 |
| ·农杆菌培养 | 第59-60页 |
| ·农杆菌侵染与共培养 | 第60页 |
| ·洗涤及选择 | 第60页 |
| ·抗性愈伤组织的预分化、分化及生根 | 第60页 |
| ·炼苗和移栽 | 第60页 |
| ·转基因水稻苗的验证 | 第60-61页 |
| ·CTAB法提取转基因水稻苗基因组DNA | 第61页 |
| ·PCR扩增潮霉素验证 | 第61页 |
| ·转基因植株中miR1858a基因表达验证 | 第61页 |
| 2 结果分析 | 第61-65页 |
| ·pre-miR1858a启动子::GUS融合表达载体的构建 | 第61页 |
| ·pre-miR1858a过表达载体及STTM干扰载体的构建 | 第61-63页 |
| ·靶基因HIN1过表达载体的构建 | 第63页 |
| ·定点突变HIN1基因 | 第63页 |
| ·水稻转基因 | 第63-64页 |
| ·转基因苗的验证 | 第64-65页 |
| 3 讨论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 攻读学位期间取得的成果 | 第76-77页 |
| 浙江师范大学学位论文诚信承诺书 | 第77-78页 |
