| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-24页 |
| ·灰飞虱 | 第15-17页 |
| ·灰飞虱概述 | 第15页 |
| ·灰飞虱的生物学特性 | 第15-16页 |
| ·灰飞虱的危害现状 | 第16-17页 |
| ·RNA干扰 | 第17-20页 |
| ·RNA干扰现象的发现 | 第17页 |
| ·诱发RNA干扰的sRNAs | 第17-19页 |
| ·小干扰RNA | 第17-18页 |
| ·MicroRNAs | 第18页 |
| ·Piwi-interacting RNAs | 第18-19页 |
| ·RNA干扰的作用机制 | 第19-20页 |
| ·起始阶段 | 第19-20页 |
| ·效应阶段 | 第20页 |
| ·放大阶段 | 第20页 |
| ·Argonaute家族蛋白 | 第20-23页 |
| ·Argonaute蛋白的进化和演变 | 第20-21页 |
| ·Argonaute蛋白的功能区域 | 第21-23页 |
| ·PAZ结构域 | 第22-23页 |
| ·PIWI结构域 | 第23页 |
| ·研究目的及意义 | 第23-24页 |
| 第二章 材料与方法 | 第24-40页 |
| ·实验材料 | 第24页 |
| ·昆虫材料 | 第24页 |
| ·菌株及载体 | 第24页 |
| ·仪器 | 第24页 |
| ·试验方法 | 第24-40页 |
| ·灰飞虱总RNA抽提 | 第25页 |
| ·RT-PCR合成cDNA | 第25-26页 |
| ·5'RACE技术 | 第26-29页 |
| ·3'RACE技术 | 第29-31页 |
| ·PCR产物纯化回收 | 第31页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第31-32页 |
| ·热激转化 | 第32页 |
| ·质粒DNA提取 | 第32-33页 |
| ·双酶切 | 第33页 |
| ·T-A克隆 | 第33-34页 |
| ·实时荧光定量PCR(qRT-PCR) | 第34-35页 |
| ·荧光定量引物设计 | 第34页 |
| ·内参基因选择 | 第34页 |
| ·荧光定量反应 | 第34-35页 |
| ·原核表达载体构建 | 第35页 |
| ·目的蛋白的诱导表达及检测 | 第35-39页 |
| ·诱导表达 | 第35-36页 |
| ·SDS-PAGE检测 | 第36-38页 |
| ·Western-blotting检测 | 第38-39页 |
| ·目的蛋白纯化与回收 | 第39-40页 |
| 第三章 灰飞虱中AGO亚家族ORF序列的克隆及表达情况分析 | 第40-55页 |
| ·实验材料 | 第40页 |
| ·植物材料 | 第40页 |
| ·试剂 | 第40页 |
| ·实验方法 | 第40-44页 |
| ·AGO1和AGO2基因EST序列的获取 | 第40-41页 |
| ·AGO1和AGO2基因ORF序列的鉴定克隆及序列分析 | 第41-43页 |
| ·AGO1和AGO2的基因差异表达情况分析 | 第43-44页 |
| ·昆虫样品的收集 | 第43页 |
| ·qRT-PCR和统计学分析 | 第43-44页 |
| ·结果与分析 | 第44-53页 |
| ·AGO1和AGO2基因ORF序列的鉴定克隆及序列分析 | 第44-49页 |
| ·AGO1和AGO2的基因差异表达分析 | 第49-53页 |
| ·不同发育阶段,灰飞虱体内AGO1和AGO2的基因差异表达分析 | 第50页 |
| ·感染RBSDV的灰飞虱体内AGO1和AGO2的基因差异表达分析 | 第50页 |
| ·不同温度压力下,灰飞虱体内AGO1和AGO2的基因差异表达分析 | 第50页 |
| ·取食不同寄主后,灰飞虱体内AGO1和AGO2的基因差异表达分析 | 第50-53页 |
| ·讨论 | 第53-55页 |
| 第四章 灰飞虱中PIWI亚家族ORF序列的克隆及表达情况分析 | 第55-69页 |
| ·实验材料 | 第55页 |
| ·植物材料 | 第55页 |
| ·试剂 | 第55页 |
| ·试验方法 | 第55-59页 |
| ·PIWI亚家族基因EST序列的获取 | 第55-56页 |
| ·PIWI亚家族基因ORF序列的鉴定克隆及序列分析 | 第56-57页 |
| ·PIWI和AGO3的基因差异表达情况分析 | 第57-59页 |
| ·昆虫样品的收集 | 第57-58页 |
| ·qRT-PCR和统计学分析 | 第58-59页 |
| ·结果与分析 | 第59-67页 |
| ·PIWI亚家族基因ORF序列的鉴定克隆及序列分析 | 第59-64页 |
| ·PIWI和AGO3的基因差异表达情况分析 | 第64-67页 |
| ·PIWI和AGO3在灰飞虱各个发育阶段的基因差异表达 | 第64页 |
| ·PIWI和AGO3在不同生长形态灰飞虱中的基因差异表达 | 第64页 |
| ·不同温度压力下,灰飞虱体内PIWI和AGO3的基因差异表达 | 第64页 |
| ·取食不同寄主后,灰飞虱体内PIWI和AGO3的基因差异表达情况 | 第64-67页 |
| ·讨论 | 第67-69页 |
| 第五章 AGO亚家族小RNA结合功能域蛋白原核表达及抗血清制备 | 第69-76页 |
| ·试验材料 | 第69页 |
| ·试剂 | 第69页 |
| ·仪器 | 第69页 |
| ·试验方法 | 第69-72页 |
| ·灰飞虱AGO1和AGO2的抗原设计 | 第69-70页 |
| ·抗原设计 | 第69-70页 |
| ·基因序列合成 | 第70页 |
| ·原核表达载体构建 | 第70-71页 |
| ·融合蛋白诱导表达与检测 | 第71页 |
| ·目的蛋白纯化与回收 | 第71页 |
| ·抗血清的制备 | 第71-72页 |
| ·免疫兔子 | 第71-72页 |
| ·取血 | 第72页 |
| ·纯化分离 | 第72页 |
| ·结果与分析 | 第72-75页 |
| ·AGO1和AGO2目的片段的验证 | 第72-73页 |
| ·pET32a-AGO1和pET32a-AGO2融合蛋白诱导表达检测分析 | 第73页 |
| ·AGO1和AGO2目的蛋白的纯化与回收 | 第73-74页 |
| ·AGO1和AGO2目的蛋白的复性 | 第74-75页 |
| ·AGO1和AGO2抗血清的制备与检测 | 第75页 |
| ·讨论 | 第75-76页 |
| 第六章 全文小结 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-83页 |
| 附录 | 第83-86页 |
| 致谢 | 第86-88页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第88-89页 |
| 浙江师范大学学位论文诚信承诺书 | 第89-90页 |
