| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-19页 |
| ·Mircro RNA概述 | 第11-13页 |
| ·Mircro RNA的产生及作用机理 | 第11页 |
| ·Mircro RNA的作用 | 第11-13页 |
| ·Mircro RNA调节发育过程 | 第11-12页 |
| ·Mircro RNA在细胞增殖中的作用 | 第12页 |
| ·Mircro RNA在细胞多能性维持中的作用 | 第12-13页 |
| ·miR-302/367概述 | 第13-15页 |
| ·miR-302/367的发现及结构 | 第13页 |
| ·miR-302/367在胚胎干细胞中的作用 | 第13-14页 |
| ·miR-302/367在体细胞重编程中的作用 | 第14-15页 |
| ·胚胎干细胞重要信号通路 | 第15-16页 |
| ·LIF/STAT3信号通路 | 第15页 |
| ·BMP/SMAD信号通路 | 第15-16页 |
| ·经典Wnt信号通路 | 第16页 |
| ·Nanog在胚胎干细胞中的作用 | 第16-19页 |
| 第二章 体外F9细胞维甲酸诱导分化模型的建立 | 第19-27页 |
| ·材料与方法 | 第19-22页 |
| ·材料 | 第19-20页 |
| ·细胞系 | 第19页 |
| ·主要试剂 | 第19页 |
| ·主要仪器及耗材 | 第19页 |
| ·溶液配制 | 第19-20页 |
| ·方法 | 第20-22页 |
| ·F9细胞培养 | 第20-21页 |
| ·维甲酸处理F9细胞 | 第21页 |
| ·F9细胞形态观察 | 第21页 |
| ·F9细胞RNA提取 | 第21页 |
| ·RNA反转录 | 第21-22页 |
| ·基因mRNA水平检测 | 第22页 |
| ·结果 | 第22-24页 |
| ·RA促进F9细胞形态发生分化 | 第22-23页 |
| ·RA促进分化相关基因的表达 | 第23-24页 |
| ·RA抑制F9细胞多能性相关基因表达 | 第24页 |
| ·讨论 | 第24-27页 |
| 第三章 miR-302/367有利于维持F9细胞形态 | 第27-39页 |
| ·材料与方法 | 第27-33页 |
| ·材料 | 第27-28页 |
| ·质粒、菌种与细胞系 | 第27页 |
| ·主要试剂 | 第27页 |
| ·主要仪器 | 第27页 |
| ·溶液配制 | 第27-28页 |
| ·方法 | 第28-33页 |
| ·重组表达载体构建 | 第28-32页 |
| ·293T和F9细胞复苏、培养与传代 | 第32页 |
| ·小鼠胚胎干细胞J1复苏、培养与传代 | 第32页 |
| ·细胞冻存 | 第32页 |
| ·细胞转染 | 第32-33页 |
| ·结果 | 第33-37页 |
| ·miR-302/367序列扩增结果 | 第33-34页 |
| ·重组载体电泳验证 | 第34页 |
| ·重组载体表达验证 | 第34-35页 |
| ·mi R-302/367 对 J1、F9 细胞形态影响 | 第35-37页 |
| ·讨论 | 第37-39页 |
| 第四章 miR-302/367促进多能性相关基因表达 | 第39-49页 |
| ·材料与方法 | 第39-44页 |
| ·材料 | 第39-40页 |
| ·质粒、菌种以及细胞系 | 第39页 |
| ·主要试剂 | 第39页 |
| ·主要耗材及仪器 | 第39-40页 |
| ·溶液配制 | 第40页 |
| ·方法 | 第40-44页 |
| ·重组质粒去内毒素大提 | 第40页 |
| ·空白载体、重组表达载体转染F9细胞 | 第40-41页 |
| ·F9细胞总RNA提取、反转录以及实时定量PCR | 第41-42页 |
| ·Western Blot检测 | 第42-44页 |
| ·结果 | 第44-47页 |
| ·miR-302/367促进多能性相关基因mRNA水平的表达 | 第44-46页 |
| ·miR-302/367促进多能性相关基因蛋白水平的表达 | 第46-47页 |
| ·讨论 | 第47-49页 |
| 第五章 miR-302/367抑制Smad2蛋白磷酸化 | 第49-63页 |
| ·材料与方法 | 第49-54页 |
| ·材料 | 第49-50页 |
| ·质粒、菌种以及细胞系 | 第49页 |
| ·主要试剂 | 第49页 |
| ·主要仪器与耗材 | 第49-50页 |
| ·溶液配制 | 第50页 |
| ·方法 | 第50-54页 |
| ·重组双荧光报告载体构建 | 第50-52页 |
| ·重组突变双荧光报告载体构建 | 第52-53页 |
| ·构建成功的载体质粒去内毒小提 | 第53页 |
| ·双荧光素酶报告验证靶基因 | 第53-54页 |
| ·F9细胞总RNA提取、反转录以及实时定量PCR | 第54页 |
| ·F9细胞总蛋白提取和Western Blot检测 | 第54页 |
| ·结果 | 第54-60页 |
| ·miR-302/367靶标预测结果 | 第54-55页 |
| ·野生型双荧光素酶载体构建结果 | 第55-56页 |
| ·突变型双荧光素酶载体构建结果 | 第56-58页 |
| ·双荧光素酶验证靶标基因 | 第58页 |
| ·miR-302/367下调Tgfbr2的mRNA水平 | 第58-59页 |
| ·miR-302/367抑制Smad2磷酸化 | 第59-60页 |
| ·讨论 | 第60-63页 |
| 第六章 miR-302/367有利于促进F9细胞增殖 | 第63-67页 |
| ·材料与方法 | 第63-65页 |
| ·材料 | 第63页 |
| ·质粒、菌种以及细胞系 | 第63页 |
| ·主要试剂 | 第63页 |
| ·主要仪器 | 第63页 |
| ·溶液配制 | 第63页 |
| ·方法 | 第63-65页 |
| ·表达载体转化、挑菌扩大培养 | 第63-64页 |
| ·重组质粒去内毒大提 | 第64页 |
| ·F9细胞培养和传代 | 第64页 |
| ·F9细胞转染 | 第64页 |
| ·F9细胞增殖检测 | 第64-65页 |
| ·结果 | 第65页 |
| ·讨论 | 第65-67页 |
| 全文讨论及结论 | 第67-71页 |
| 讨论 | 第67-69页 |
| 结论 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-77页 |
| 附录 | 第77-81页 |
| 附录1 定量引物序列 | 第77-79页 |
| 附录2 扩增miR-302/367及其靶标基因 3’UTR引物序列 | 第79-81页 |
| 英文缩略词表 | 第81-83页 |
| 致谢 | 第83-85页 |
| 作者简介 | 第85页 |
