| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstact | 第8-10页 |
| 前言 | 第10-13页 |
| 第一部分 血清Resistin与肥胖性T2DM恒河猴模型的相关性分析 | 第13-36页 |
| 一、肥胖性T2DM恒河猴模型的构建 | 第13-26页 |
| 1 实验材料 | 第13-14页 |
| ·实验动物 | 第13页 |
| ·饲料配方 | 第13-14页 |
| ·试剂与耗材 | 第14页 |
| ·仪器设备 | 第14页 |
| 2 实验方法 | 第14-17页 |
| ·高糖高脂饮食诱导恒河猴高脂血症和肥胖症 | 第14-15页 |
| ·低剂量STZ诱发肥胖性T2DM恒河猴模型及评价 | 第15-16页 |
| ·组织病理学检测 | 第16-17页 |
| 3 结果 | 第17-25页 |
| ·体重、血脂、空腹血糖、胰岛素、C肽以及胰岛素抵抗指数临床指标监测结果 | 第17页 |
| ·葡萄糖耐量试验和胰岛素耐受试验 | 第17-21页 |
| ·尿糖的定性检测 | 第21-22页 |
| ·T2DM胰岛素抵抗相关细胞因子Resistin检测 | 第22页 |
| ·胰腺、肝脏和肾脏的组织病理学分析 | 第22-24页 |
| ·胰岛组织病理学分析 | 第24页 |
| ·肝脏组织糖原染色分析结果 | 第24-25页 |
| 4 讨论 | 第25-26页 |
| 二、血清Resistin与肥胖性T2DM临床指标的相关性分析及其在糖代谢中的释放特征 | 第26-36页 |
| 1 实验材料 | 第26-27页 |
| ·实验动物 | 第26-27页 |
| ·试剂与耗材 | 第27页 |
| ·仪器设备 | 第27页 |
| 2 实验方法 | 第27-28页 |
| ·诱导T2DM模型 | 第27-28页 |
| ·血清Resistin与T2DM恒河猴模型的血脂、血糖、糖化血红蛋白、胰岛素、胰岛素抵抗指数和β细胞功能的相关性分析 | 第28页 |
| ·血清Resistin在T2DM恒河猴模型葡萄糖代谢过程中的变化 | 第28页 |
| 3 结果 | 第28-34页 |
| ·T2DM猴血脂、血糖、糖化血红蛋白、胰岛素等指标检测结果 | 第28-29页 |
| ·血清Resistin与T2DM恒河猴模型的血脂、血糖、糖化血红蛋白、胰岛素、胰岛素抵抗指数和β细胞功能的相关性分析结果 | 第29-31页 |
| ·葡萄糖耐量试验 | 第31页 |
| ·在葡糖糖耐量试验中对血糖、胰岛素和Resistin释放的变化曲线AUC计算结果 | 第31页 |
| ·对照组与T2DM组的组内比较 | 第31-34页 |
| 4 讨论 | 第34-36页 |
| 第二部分 恒河猴Resistin基因的克隆与慢病毒载体的构建 | 第36-58页 |
| 一、恒河猴Resistin基因克隆及分析 | 第36-46页 |
| 1 实验材料 | 第36-37页 |
| ·实验动物 | 第36页 |
| ·试剂与耗材 | 第36-37页 |
| ·仪器设备 | 第37页 |
| 2 实验方法 | 第37-41页 |
| ·引物设计与合成 | 第37页 |
| ·总RNA的提取 | 第37-38页 |
| ·cDNA的合成 | 第38页 |
| ·恒河猴Resistin基因的扩增 | 第38-39页 |
| ·胶回收PCR产物 | 第39-40页 |
| ·酶切,连接和转化 | 第40-41页 |
| ·提取质粒 | 第41页 |
| ·用XbaI和PstI双酶切鉴定. | 第41页 |
| ·测序及序列分析 | 第41页 |
| 3 结果 | 第41-46页 |
| ·脂肪组织和胰腺组织总RNA抽提及检测结果 | 第41-42页 |
| ·Resistin基因的PCR扩增结果 | 第42页 |
| ·Resistin基因克隆及鉴定结果 | 第42-44页 |
| ·测序及序列分析结果 | 第44-46页 |
| 二、恒河猴Resistin重组慢病毒载体的构建及包装 | 第46-58页 |
| 1 实验材料 | 第46-47页 |
| ·质粒、菌株及细胞 | 第46页 |
| ·试剂与耗材 | 第46页 |
| ·仪器设备 | 第46-47页 |
| ·PCR引物设计与合成 | 第47页 |
| 2 实验方法 | 第47-50页 |
| ·macRETN-PLV-EF1a-EGFP[2A]Puro重组质粒的建立 | 第47-48页 |
| ·293T细胞的复苏 | 第48页 |
| ·293T细胞的传代 | 第48页 |
| ·慢病毒载体的转染 | 第48-49页 |
| ·携带macRETN基因重组慢病毒颗粒的电镜检测 | 第49页 |
| ·qPCR法测定慢病毒滴度 | 第49-50页 |
| 3 结果 | 第50-57页 |
| ·macRETN ORF扩增结果 | 第50页 |
| ·macRETN-PLV-EF1a-EGFP[2A]Puro重组质粒酶切及测序鉴定结果 | 第50-52页 |
| ·macRETN-PLV-EF1a-EGFP[2A]Puro慢病毒颗粒的包装及收获 | 第52页 |
| ·携带macRETN基因重组慢病毒的滴度测定结果 | 第52-55页 |
| ·携带macRETN基因重组慢病毒颗粒的电镜检测结果 | 第55页 |
| ·携带macRETN基因重组慢病毒在293T细胞中的感染效率 | 第55页 |
| ·macRETN基因在293T细胞中mRNA水平的表达检测结果 | 第55-57页 |
| 4 讨论 | 第57-58页 |
| 第三部分 恒河猴Resistin对人肝细胞葡萄糖代谢的调控 | 第58-75页 |
| 1 实验材料 | 第58-59页 |
| ·细胞株 | 第58页 |
| ·试剂与耗材 | 第58页 |
| ·仪器设备 | 第58-59页 |
| ·引物 | 第59页 |
| 2 实验方法 | 第59-65页 |
| ·Huh-7细胞的复苏 | 第59-60页 |
| ·Huh-7细胞的传代 | 第60页 |
| ·Huh-7细胞的冻存 | 第60-61页 |
| ·慢病毒转染 | 第61页 |
| ·PCR检测 | 第61页 |
| ·葡萄糖吸收实验 | 第61页 |
| ·用 Qiagen RNeasy® Mini Kit 和 RNase-Free DNase Set试剂盒提取细胞的 RNA | 第61-62页 |
| ·Qiagen RT2 First Strand 试剂盒反转录第一条 cDNA | 第62-63页 |
| ·cDNA浓度的测定 | 第63-64页 |
| ·基因芯片分析 | 第64-65页 |
| ·差异基因的显著性分析 | 第65页 |
| 3 结果 | 第65-71页 |
| ·macRETN重组慢病毒感染Huh-7人肝细胞对报告基因eGFP荧光检测结果 | 第65页 |
| ·PCR检测结果 | 第65页 |
| ·葡萄糖吸收实验 | 第65-68页 |
| ·cDNA浓度的测定 | 第68页 |
| ·实时定量PCR特异性检验 | 第68-69页 |
| ·基因芯片的数据的质量控制 | 第69页 |
| ·看家基因的选择结果 | 第69页 |
| ·基因芯片的差异性基因分析 | 第69-71页 |
| ·基因的差异显著性分析 | 第71页 |
| 4 讨论 | 第71-75页 |
| 小结 | 第75页 |
| 展望 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-83页 |
| 附录 | 第83-88页 |
| 一、缩略词 | 第83-85页 |
| 二、主要溶液及培养基的配制 | 第85-88页 |
| 个人简历 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
