| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-16页 |
| ·人乳头瘤病毒简介 | 第10页 |
| ·HPV的一般情况及生活周期 | 第10页 |
| ·HPV感染的危害性 | 第10-11页 |
| ·病毒样颗粒及VLP疫苗 | 第11页 |
| ·HPV预防性疫苗研究进展 | 第11-13页 |
| ·HPV疫苗制备常用表达系统 | 第13-15页 |
| ·原核表达系统 | 第13页 |
| ·酵母表达系统 | 第13-14页 |
| ·酿酒酵母表达系统 | 第13-14页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第14页 |
| ·汉逊酵母表达系统 | 第14页 |
| ·昆虫杆状病毒表达系统 | 第14-15页 |
| ·本课题主要研究内容、目的及意义 | 第15-16页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第16-44页 |
| ·材料 | 第16-25页 |
| ·质粒及菌株 | 第16页 |
| ·主要试剂 | 第16-18页 |
| ·主要仪器 | 第18页 |
| ·常用试剂配制 | 第18-25页 |
| ·实验方法 | 第25-44页 |
| ·密码子优化人乳头瘤病毒主要衣壳蛋白L1(HPV L1)在大肠杆菌中的表达 | 第25-33页 |
| ·引物设计与PCR扩增HPV L1目的基因 | 第25-28页 |
| ·HPV 16L1非融合及Trx融合表达重组质粒的构建 | 第28-31页 |
| ·HPV L1 GST融合表达质粒的构建 | 第31-32页 |
| ·HPV L1融合蛋白37℃培养条件下的诱导表达 | 第32-33页 |
| ·表达产物的分析与鉴定 | 第33页 |
| ·不同密码子优化HPV16基因序列在毕赤酵母中的表达 | 第33-44页 |
| ·HPV16L1不同基因序列的分析 | 第33页 |
| ·重组质粒的构建 | 第33-35页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第35-40页 |
| ·重组质粒转化酵母感受态细胞 | 第40-41页 |
| ·HPV16L1在毕赤酵母中的表达 | 第41-42页 |
| ·表达产物的分析与鉴定 | 第42-43页 |
| ·HPV16L1重组蛋白和病毒样颗粒(VLPs)的初步纯化和电镜观察 | 第43-44页 |
| 第三章 实验结果 | 第44-66页 |
| ·HPVL1基因在原核表达系统中的构建、表达与鉴定 | 第44-49页 |
| ·PCR产物及重组质粒鉴定 | 第44页 |
| ·不同融合形式HPV16 L1蛋白的表达 | 第44-46页 |
| ·不同宿主菌对HPV L1-GST融合蛋白表达的影响 | 第46-47页 |
| ·基因的不同核苷酸序列特征对HPV16 L1表达的影响 | 第47-48页 |
| ·不同基因型HPVL1蛋白的GST融合表达 | 第48页 |
| ·不同诱导培养温度对表达的融合蛋白可溶性的影响 | 第48-49页 |
| ·小结 | 第49页 |
| ·不同密码子优化HPV16L1基因序列在毕赤酵母中的构建、表达与鉴定 | 第49-62页 |
| ·HPV16L1不同基因序列的分析 | 第49-52页 |
| ·PCR体外扩增HPV16 L1基因以及重组质粒酶切鉴定 | 第52-56页 |
| ·PCR扩增HPV16L1基因结果 | 第52-53页 |
| ·PCR产物及载体的酶切和回收 | 第53-54页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第54-56页 |
| ·不同密码子优化HPV16L1基因序列在毕赤酵母中的表达 | 第56-59页 |
| ·HPV16L1基因序列M16、Y16、P16、W16在pPink HC中的表达 | 第56页 |
| ·比较HPV16L1基因序列M16、Y16、P16、W16在pPink HC和pPinkLC中的表达 | 第56-59页 |
| ·不同蛋白酶缺陷、融合及截断形式对HPV16L1基因在毕赤酵母中表达的影响 | 第59-60页 |
| ·HPV16L1重组质粒Y16HC在pPink Strain1、2、3、4中的表达 | 第59-60页 |
| ·HPV16L1不同融合及截断形式的表达 | 第60页 |
| ·HPV16L1不同基因序列表达产物的可溶性分析和病毒样颗粒的组装能力的对比 | 第60-62页 |
| ·小结 | 第62页 |
| ·讨论 | 第62-66页 |
| 展望 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 作者简历 | 第74-76页 |
