| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 缩略词 | 第9-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-19页 |
| 1 溶瘤腺病毒 | 第14-16页 |
| 2 CD47，SIRPα 概述 | 第16-17页 |
| 3 SIRPα-CD47 途径 | 第17-18页 |
| 4 本课题研究内容 | 第18-19页 |
| 第二章 溶瘤腺病毒SG635-SF的构建及鉴定 | 第19-43页 |
| 1 实验材料 | 第19-22页 |
| ·菌株，质粒和细胞 | 第19页 |
| ·引物合成 | 第19页 |
| ·实验试剂 | 第19-20页 |
| ·培液配制 | 第20-21页 |
| ·主要的仪器与设备 | 第21-22页 |
| 2 实验方法 | 第22-34页 |
| ·p74 -Tp -CCAU–SF质粒构建 | 第22-30页 |
| ·碱裂解法小量抽提质粒pCA19 –SGM的DNA | 第22-23页 |
| ·pCA19 -SGM质粒为模板，进行PCR反应，获取SF基因片段 | 第23页 |
| ·配制琼脂糖凝胶 | 第23-24页 |
| ·上样电泳 | 第24页 |
| ·DNA片段的回收 | 第24页 |
| ·SF酶切 | 第24-25页 |
| ·pCA20 骨架载体的获得 | 第25页 |
| ·pCA20 -SF质粒的连接 | 第25页 |
| ·DH5α 感受态细胞制备 | 第25-26页 |
| ·pCA20 -SF质粒连接产物的转化 | 第26页 |
| ·pCA20-SF质粒进行酶切鉴定 | 第26-27页 |
| ·mCMV-SF基因片段 | 第27页 |
| ·获取带粘性末端的p74 -Tp载体骨架 | 第27-28页 |
| ·P74-TP-CCAU-SF的连接 | 第28页 |
| ·P74-TP-CCAU-SF的酶切鉴定 | 第28-29页 |
| ·质粒大量提取 | 第29-30页 |
| ·Ad5-eGFP，Ad35-eGFP感染卵巢癌细胞SK-OV-3，HO8910，检测感染效率 | 第30页 |
| ·SG635-SF溶瘤腺病毒包装和鉴定 | 第30-32页 |
| ·病毒DNA提取 | 第30-31页 |
| ·溶瘤腺病毒SG635 -SF目的基因鉴定 | 第31页 |
| ·野生病毒株鉴定 | 第31-32页 |
| ·病毒的大量扩增，纯化，滴度测定 | 第32-34页 |
| ·病毒的大量扩增 | 第32-33页 |
| ·纯化病毒 | 第33-34页 |
| ·测定病毒滴度 | 第34页 |
| 3 实验结果 | 第34-42页 |
| ·外源基因SF结构图 | 第34-35页 |
| ·SF基因片段的获取 | 第35页 |
| ·pCA20-SF酶切鉴定 | 第35-36页 |
| ·mCMV-SF片段的获得 | 第36页 |
| ·p74-TP-CCAU-SF酶切鉴定 | 第36-37页 |
| ·Ad5-EGFP，Ad35-EGFP感染卵巢癌细胞HO8910 和SK-OV-3 | 第37-41页 |
| ·溶瘤腺病毒SG635-SF的鉴定，扩增，纯化及滴度测定 | 第41-42页 |
| 4 讨论 | 第42-43页 |
| 第三章 溶瘤腺病毒SG635-SF在体外的抗肿瘤作用研究 | 第43-58页 |
| 1 实验材料 | 第43-44页 |
| ·实验所需细胞株及病毒 | 第43页 |
| ·主要试剂配制 | 第43-44页 |
| ·主要实验仪器 | 第44页 |
| 2 实验方法 | 第44-48页 |
| ·流式细胞仪检测卵巢癌SK-OV-3，HO8910 的CD47 表达水平 | 第44页 |
| ·Western Blotting实验步骤 | 第44-46页 |
| ·ELISA实验步骤 | 第46页 |
| ·病毒增殖实验 | 第46页 |
| ·MTT实验检测溶瘤腺病毒对人卵巢癌细胞的杀伤作用 | 第46-47页 |
| ·溶瘤腺病毒感染人卵巢癌细胞株后测CD47 表达量 | 第47-48页 |
| ·流式测凋亡 | 第48页 |
| 3 体外实验结果 | 第48-56页 |
| ·流式细胞仪检测卵巢癌HO8910 和SK-OV-3 的CD47 表达水平 | 第48-49页 |
| ·Western Blotting检测融合蛋白SF在SK-OV-3，HO8910 中的表达 | 第49-50页 |
| ·ELISA检测融合蛋白SF在SK-OV-3，HO8910 中的表达 | 第50-51页 |
| ·溶瘤腺病毒SG635-SF、SG635 在卵巢癌细胞SK-OV-3，HO8910 中的增殖能力 | 第51-52页 |
| ·MTT实验 | 第52页 |
| ·溶瘤腺病毒感染卵巢癌细胞后，检测CD47 的表达水平 | 第52-55页 |
| ·流式检测溶瘤腺病毒感染人卵巢癌细胞后，对细胞凋亡的影响 | 第55-56页 |
| 4 讨论 | 第56-58页 |
| 第四章 溶瘤腺病毒SG635-SF对卵巢癌细胞裸鼠模型的抗肿瘤作用研究 | 第58-65页 |
| 1 实验材料 | 第58页 |
| ·实验所需病毒及细胞 | 第58页 |
| ·实验动物 | 第58页 |
| 2 实验方法 | 第58-60页 |
| ·裸鼠卵巢癌移植瘤模型的建立 | 第58-59页 |
| ·肿瘤标本剥离及固定 | 第59-60页 |
| 3 实验结果 | 第60-63页 |
| ·裸鼠卵巢癌移植瘤模型的建立及溶瘤病毒治疗的疗效 | 第60-61页 |
| ·HE染色病理切片结果 | 第61页 |
| ·Ki67 免疫组化结果 | 第61页 |
| ·HEXON结果 | 第61-62页 |
| ·免疫组化检测CD47 结果 | 第62页 |
| ·移植瘤中CD68 的变化 | 第62-63页 |
| 4 讨论 | 第63-65页 |
| 第五章 结论 | 第65-68页 |
| 参考文献 | 第68-71页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
