| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-23页 |
| 1. 生物质能的发展与纤维素的结构 | 第11-13页 |
| ·新型能源植物—芒草 | 第11页 |
| ·木质纤维素的结构 | 第11-12页 |
| ·木质素的结构 | 第12-13页 |
| 2. 木质素的高效降解对实现纤维素资源的有效利用具有重要意义 | 第13-17页 |
| ·木质素的降解 | 第13页 |
| ·木质素的降解酶系 | 第13-14页 |
| ·漆酶的特性 | 第14-15页 |
| ·漆酶的应用 | 第15-16页 |
| ·漆酶的分类 | 第16-17页 |
| 3. 瘤胃微生物中蕴含着丰富的可开发的基因资源 | 第17-19页 |
| ·瘤胃微生物的种类 | 第17-18页 |
| ·芒草驯养对发掘牛瘤胃微生物纤维素降解酶的意义 | 第18-19页 |
| 4. 开发利用未培养微生物资源的重要研究方法—宏基因组学 | 第19-21页 |
| ·未培养微生物 | 第19页 |
| ·宏基因组学技术在漆酶研究中的应用 | 第19-21页 |
| ·利用宏基因组学进行漆酶研究的展望 | 第21页 |
| 5. 本论文的选题依据及技术路线 | 第21-23页 |
| ·选题依据 | 第21-22页 |
| ·技术路线 | 第22-23页 |
| 第二章 材料与方法 | 第23-35页 |
| 1 材料 | 第23-25页 |
| ·实验材料及来源 | 第23页 |
| ·实验仪器设备 | 第23页 |
| ·实验药品与试剂 | 第23-25页 |
| 2 方法 | 第25-35页 |
| ·Fosmid文库的筛选 | 第25-26页 |
| ·Fosmid文库的筛选(功能筛选法) | 第25页 |
| ·Fosmid文库中具有漆酶活性克隆子的保存 | 第25-26页 |
| ·亚克隆文库的构建和筛选 | 第26-30页 |
| ·Fosmid文库克隆子质粒的提取 | 第26-27页 |
| ·pUC19质粒载体的提取 | 第27-28页 |
| ·目的片段与pUC19载体的酶切 | 第28页 |
| ·目的片段酶切产物与pUC19载体的酶切产物回收 | 第28页 |
| ·目的片段与pUC19回收产物的连接 | 第28-29页 |
| ·连接产物的转化 | 第29页 |
| ·亚克隆文库的筛选 | 第29-30页 |
| ·亚克隆文库中阳性克隆的检测 | 第30页 |
| ·功能基因序列分析 | 第30页 |
| ·原核表达载体构建 | 第30-32页 |
| ·特异引物的设计 | 第30页 |
| ·PCR扩增 | 第30-31页 |
| ·pET30a(+)质粒载体以及pUC19-134B2质粒提取 | 第31页 |
| ·酶切体系 | 第31页 |
| ·制备感受态 | 第31页 |
| ·转化 | 第31-32页 |
| ·诱导表达条件的优化 | 第32-33页 |
| ·最佳诱导剂剂量的确定 | 第32页 |
| ·最佳诱导温度的确定 | 第32页 |
| ·最佳诱导时间的确定 | 第32-33页 |
| ·漆酶粗酶液的制备 | 第33页 |
| ·漆酶酶学性质的初步研究 | 第33-35页 |
| ·漆酶活力的测定(ABTS法) | 第33页 |
| ·粗酶液中漆酶最适pH值的测定 | 第33页 |
| ·粗酶液中漆酶最适温度的测定 | 第33-34页 |
| ·粗酶液中漆酶热稳定性的研究 | 第34页 |
| ·粗酶液中漆酶pH稳定性的研究 | 第34页 |
| ·金属离子对粗酶液活力的影响 | 第34-35页 |
| 第三章 结果与分析 | 第35-47页 |
| ·Fosmid文库的筛选 | 第35页 |
| ·亚克隆文库的构建与筛选 | 第35-38页 |
| ·Fosmid文库阳性克隆子与pUC19载体质粒的提取 | 第35-36页 |
| ·目的片段酶切产物与pUC19载体连接 | 第36-37页 |
| ·亚克隆文库筛选结果 | 第37页 |
| ·亚克隆质粒pUC19-134B2-29的双酶切鉴定 | 第37-38页 |
| ·亚克隆序列分析 | 第38-39页 |
| ·序列及其编码氨基酸序列分析 | 第38页 |
| ·理化性质分析 | 第38-39页 |
| ·信号肽分析 | 第39页 |
| ·unlac134B2原核表达 | 第39-41页 |
| ·构建目的基因表达载体 | 第39-40页 |
| ·基因工程菌功能验证 | 第40-41页 |
| ·诱导条件的优化结果 | 第41-43页 |
| ·最佳诱导剂剂量的确定 | 第41页 |
| ·最佳诱导温度的确定 | 第41-42页 |
| ·最佳诱导时间的确定 | 第42-43页 |
| ·漆酶酶学性质初步分析 | 第43-47页 |
| ·最适反应pH值的确定 | 第43页 |
| ·最适反应温度的确定 | 第43-44页 |
| ·漆酶的热稳定性 | 第44页 |
| ·漆酶的pH稳定性 | 第44-45页 |
| ·金属离子对漆酶活力的影响 | 第45-47页 |
| 第四章 讨论 | 第47-49页 |
| 第五章 结论、创新点及下一步工作计划 | 第49-51页 |
| ·结论 | 第49页 |
| ·创新点 | 第49页 |
| ·下一步工作计划 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-56页 |
| 附录 | 第56-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 作者简介 | 第61页 |
